[發明專利]2019新型冠狀病毒刺突蛋白受體結合結構域蛋白及應用

在審

• 申請號: 202010776273.0
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN112028976A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 穆海東;汪寧梅;李敏
• 申請（專利權）人: 上海裕隆生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16;C12N15/50;C12N15/70;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 孫旭華

本發明公開了一種2019新型冠狀病毒刺突蛋白受體結合結構域蛋白及其應用。該受體結合結構域蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明還公開了2019新型冠狀病毒刺突蛋白受體結合結構域蛋白應用于2019新型冠狀病毒診斷試劑、病毒抗原及檢測試劑盒。本發明提供的活性蛋白可與針對該表位的抗體結合，廣泛用在化學發光以及膠體金等診斷試劑領域。本發明技術方案提供的膠體金檢測試劑條具有特異性強，靈敏度高的特點。本發明可以使得面臨突入其來的疫情，快速獲得所需要的抗原，大概用一周的時間以較低成本制備出足量的抗原，用于診斷試劑的研發生產。

技術領域

本發明涉及本發明涉及生物技術檢測領域，具體而言，涉及一種2019新 型冠狀病毒刺突蛋白受體結合結構域蛋白及其應用。

背景技術

新型冠狀病毒COVID-19感染的肺炎以發熱、乏力、干咳等為主要表現， 少數患者伴有鼻塞、流涕、腹瀉等上呼吸道和消化道癥狀。重癥病例多在一 周后出現呼吸困難，嚴重者快速進展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、 難以糾正的代謝性酸中毒和出凝血功能障礙。迄今新型冠狀病毒COVID-19還 沒有針對性的特效藥。一些個案報道的治療藥物仍需更多的臨床實踐證明效 果，相關疫苗的研發也在開展中，但距離臨床應用尚需時間。當務之急是盡 快研究有效的診斷試劑，早診斷、早隔離、切斷傳播途徑，控制疫情蔓延。

新型冠狀病毒COVID-19核酸檢測有較高的特異性和靈敏度，但是該檢測 方法對技術要求高，容易出現假陰性，標本需要特殊處理，要求具備PCR擴 增儀及凝膠電泳等專業的儀器設備，對新型冠狀病毒的檢測用時長，需專業 技術人員操作和判斷檢測結果，無法應用于社區、基層醫院、機場、海關甚 至家庭等基層的早期初步篩查。

因此，亟需一種更早期、更準確、更快捷、更有效的檢測新型冠狀病毒 COVID-19的診斷試劑，進行早期鑒別診斷，這種快速診斷試劑面臨巨大的需 求。

抗體檢測快速診斷試劑的核心原料是抗原，上述2019新型冠狀病毒刺突 蛋白受體結合結構域是很好的目標分子。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明旨在提供一種2019新型冠狀病毒 刺突蛋白受體結合結構域蛋白及其應用。

本發明提供的技術方案如下：

根據本發明的第一個方面，提供了一種2019新型冠狀病毒刺突蛋白 受體結合結構域蛋白，該受體結合結構域蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

根據本發明的第二個方面，提供了一種2019新型冠狀病毒刺突蛋白 受體結合結構域蛋白的制備方法，該制備方法包括下列步驟：

S1預測：預測所述的蛋白的受體結合結構域的氨基酸序列；

S2表達：通過大腸桿菌包涵體表達的方式表達所述的蛋白；

S3純化：變性條件下通過雜蛋白洗滌和親和的方法純化所述的蛋白， 即獲得目標蛋白；

S4復性：在具有二硫鍵氧化還原對的復性液中，運用稀釋法進行所述 的目標蛋白復性；

S5純化：復性后的所述的目標蛋白通過離子柱、分子篩進一步純化， 去除雜蛋白，即得到純化的2019新型冠狀病毒刺突蛋白受體結合結構域 蛋白。

進一步地，在步驟S3中，所述的雜蛋白洗滌包括二步洗滌：第一步： 使用10毫摩爾/升的三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽，150毫摩爾/升的氯化鈉， pH 7.4，1％曲拉通的溶液洗滌；以及第二步：使用10毫摩爾/升的三(羥 甲基)氨基甲烷鹽酸鹽，150毫摩爾/升的氯化鈉，pH 7.4的溶液洗滌。

進一步地，所述的大腸桿菌包涵體表達包括大腸桿菌密碼子優化的基 因合成、大腸桿菌轉化和表達、大腸桿菌破菌和大腸桿菌包涵體獲得。