[發(fā)明專利]一種定量檢測人幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1的化學(xué)發(fā)光試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010775982.7
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111965361A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐昊;繆瑜姍;仲彩銘;胡家勛;王偉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海長征醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/573;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 李陽

本發(fā)明涉及免疫分析領(lǐng)域，具體是一種定量檢測人幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1(YKL?40/CHI3L1)的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括包被有人YKL?40單克隆抗體或人YKL?40多克隆抗體的化學(xué)發(fā)光板，生物素標(biāo)記的人YKL?40單克隆抗體或人YKL?40多克隆抗體，鏈霉親和素標(biāo)記的酶底物，以及酶促發(fā)光底物。本發(fā)明采用酶促化學(xué)發(fā)光法，利用化學(xué)發(fā)光板中的人YKL?40單克隆抗體或人YKL?40多克隆抗體作為捕獲抗體，以生物素標(biāo)記的人YKL?40單克隆抗體或人YKL?40多克隆抗體作為檢測抗體，用酶底物為催化酶催化發(fā)光底物發(fā)光，并配合生物素放大系統(tǒng)進(jìn)行檢測。提高了試劑盒的檢測靈敏度和準(zhǔn)確性，且便于大通量樣本檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種定量檢測人幾丁質(zhì)酶3樣蛋1(YKL-40/CHI3L1)的化學(xué)發(fā)光試劑盒。

背景技術(shù)

幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1(chitinase-3-like-1protein，簡稱CHI3L1)，又稱為軟骨糖蛋白39(YKL-40)，是糖基水解酶18家族成員，但其缺乏水解活性，CHI3L1蛋白參與細(xì)胞增值和血管生成。目前學(xué)術(shù)界對其研究發(fā)現(xiàn)幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1與哮喘和過敏性疾病以及多種腫瘤發(fā)生有關(guān)。

目前幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1的檢測主要應(yīng)用于科學(xué)研究，對于臨床的研究還處于初發(fā)階段。針對幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1的檢測，目前主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)、免疫組織化學(xué)法(IHC)等，酶聯(lián)免疫法檢測幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1為血清學(xué)檢測，受其方法學(xué)限制，檢測靈敏度較低，檢測線性范圍較窄；免疫組織化學(xué)法的檢測樣本來源于人體組織/細(xì)胞，樣本獲取困難，檢測成本高，檢測技術(shù)門檻較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測靈敏度高、特異性好、操作簡便，檢測通量高，檢測成本低，且不需要太多復(fù)雜的輔助設(shè)備和試劑的定量檢測人幾丁質(zhì)酶3樣蛋1(YKL-40/CHI3L1)的化學(xué)發(fā)光試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種定量檢測人幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1(YKL-40/CHI3L1)的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括：包被有人YKL-40單克隆抗體或人YKL-40多克隆抗體的化學(xué)發(fā)光板，生物素標(biāo)記的人YKL-40單克隆抗體或人YKL-40多克隆抗體，鏈霉親和素標(biāo)記的酶底物，以及酶促發(fā)光底物。

進(jìn)一步的，包被于化學(xué)發(fā)光板中的人YKL-40單克隆抗體或人YKL-40多克隆抗體的濃度為2～8ug/ml。其中的包被封閉液為磷酸鹽緩沖液或碳酸鹽緩沖液。

進(jìn)一步的，所述的化學(xué)發(fā)光板采用保護(hù)蛋白進(jìn)行封閉處理，所述的保護(hù)蛋白為酪蛋白、牛血清白蛋白、明膠、動(dòng)物血清或人血清等。

進(jìn)一步的，所述的生物素標(biāo)記的人YKL-40單克隆抗體或人YKL-40多克隆抗體的緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris鹽緩沖液。

進(jìn)一步的，所述的鏈霉親和素標(biāo)記的酶底物中的酶為辣根過氧化氫酶、堿性磷酸酶等。

更進(jìn)一步的，所述的鏈霉親和素標(biāo)記的酶底物的緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris鹽緩沖液。

進(jìn)一步的，所述的生物素標(biāo)記抗體的緩沖液和鏈霉親和素的緩沖液中，可加入適量的表面活性劑(包括但不限于吐溫20等)，用于增加去除檢測背景值，提高信噪比。

進(jìn)一步的，所述的酶促發(fā)光底物為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶的酶促發(fā)光底物等。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的試劑盒中還包含人YKL-40校準(zhǔn)品。

本發(fā)明的第二方面，提供一種如上所述的定量檢測人YKL-40的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

(A)制備包被有人YKL-40單克隆抗體或人YKL-40多克隆抗體的化學(xué)發(fā)光板；