[發(fā)明專利]抗CEACAM5納米抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010774701.6
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN112028997B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 單鴻;李丹;梅超明;楊帆
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學附屬第五醫(yī)院
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提出一種納米抗體。該抗體：(1)具有SEQ ID NO：1或2或3或4或5或6所示的氨基酸序列；(2)各序列之間具有較高的序列同源性，例如80％以上的序列同源性。根據(jù)本發(fā)明實施例的核酸特異性編碼前面所述的納米抗體，所述納米抗體能夠特異性靶向CEACAM5，具有高水溶性、高耐性、高穩(wěn)定性，高抗原結(jié)合性、低免疫原性以及較強的組織穿透力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及納米抗體及其制備方法和應用，該納米抗體可應用于CEACAM5蛋白檢測試劑及治療性抗體的研發(fā)。

背景技術(shù)

癌胚抗原(CEA)是一種從結(jié)腸癌和胎兒腸組織中發(fā)現(xiàn)的蛋白，臨床上較早用于腫瘤檢測的標志物，在正常人的體細胞中CEA的生成量較少，而在惡性腫瘤患者的多種器官中都會有表達，能夠用于腫瘤的診斷及鑒別，但是該腫瘤標準物的診斷缺少特異性。CEA很高主要出現(xiàn)在胰腺癌、大腸癌、乳腺癌、胃癌以及小細胞肺癌等多種腫瘤中，CEA在腫瘤患者血清中診斷的靈敏度與腫瘤有無淋巴結(jié)、腫瘤的大小以及腫瘤是否發(fā)生其他部位的轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。

1993年Hamers-Casterman等在nature上報道了在駱駝血清中大量存在的一種天然缺失輕鏈的抗體，即重鏈抗體。單域重鏈抗體是指僅由重鏈抗體可變區(qū)組成的基因工程抗體，又稱為VHH抗體或者納米抗體(Nb)。與普通抗體相比，駱駝重鏈抗體除了缺少輕鏈之外，其重鏈可變區(qū)與鉸鏈區(qū)之間沒有CH1區(qū)。恒定區(qū)CH1是與輕鏈錨定的部位，在納米抗體的基因組中存在，但在mRNA形成中被剪掉，納米抗體靠僅有的3個CDRs就具備抗原的特異性和高親和力，而普通抗體則需要6個CDRs，是目前已知的可結(jié)合目標抗原的最小單位。和普通抗體相比，納米抗體分子量小，結(jié)構(gòu)簡單，易于進行基因改造，體積小，抗原特異性好，組織穿透力強，穩(wěn)定性高，在疾病的診斷及治療方面有廣闊的應用前景。基于此，我們研發(fā)了全新的針對CEACAM5的納米抗體，以期進一步提高抗體的功能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種針對CEACAM5的納米抗體，同時提供該納米抗體的編碼序列以及制備方法。

本申請的發(fā)明人采用羊駝免疫與噬菌體展示技術(shù)相互結(jié)合，開發(fā)出了靶向CEACAM5的高親和納米抗體。

一方面，本發(fā)明提出了一種納米抗體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述納米抗體包括：(1)具有SEQ ID NO：1或2或3或4或5或6所示的氨基酸序列；各序列之間具有較高的序列同源性，例如80％以上的序列同源性。根據(jù)本發(fā)明實施例的納米抗體是特異性靶向CEACAM5蛋白的抗體，能夠結(jié)合天然構(gòu)象的CEACAM5蛋白，并且所述納米抗體具有如下較普通抗體的獨特性質(zhì):(1)高水溶性、高耐性、高穩(wěn)定性，高抗原結(jié)合性、低免疫原性以及較強的組織穿透力。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述納米抗體具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，所述納米抗體的框架區(qū)1(FR1)具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，所述納米抗體的互補決定區(qū)1(CDR1)具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述納米抗體的框架區(qū)2(FR2)具有SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列，所述納米抗體的互補決定區(qū)2(CDR2)具有SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述納米抗體的框架區(qū)3(FR3)具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述納米抗體的互補決定區(qū)3(CDR)具有SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述納米抗體的框架區(qū)4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。