[發(fā)明專利]靶向KrasG12D

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010773469.4
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111876421A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔣望
• 申請（專利權(quán)）人: 蔣望
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/864;C12N15/09;A61K31/7105;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

一種靶向Kras^G12D突變轉(zhuǎn)錄本的gRNA序列，其基因序列由gRNA?DR和間隔序列組成，所述的gRNA?DR的基因序列如SEQ ID NO.7所示，所述的間隔序列如SEQ ID NO.1～6中的任意一種所示。本發(fā)明還提供了一種腺病毒載體，其攜帶靶向Kras^G12D突變轉(zhuǎn)錄本的gRNA序列。還提供了一種腺病毒載體，其攜帶靶向Kras^G12D突變轉(zhuǎn)錄本的gRNA序列和編碼CasRx蛋白的基因序列。本發(fā)明還提供了上述的腺病毒載體在制備以Kras^G12D作為靶點的治療癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明比之前的shRNA、siRNA的靶向性和特異性均提高。比CRISPR?Cas9技術(shù)具有更低的脫靶效應。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學生物領(lǐng)域，涉及一種載體，具體來說是一種靶向Kras^G12D突變轉(zhuǎn)錄本的gRNA序列、攜帶CasRx系統(tǒng)的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建方法和應用。

背景技術(shù)

基因改變(例如突變，擴增，重排等)通常導致癌基因的活化，從而驅(qū)動癌癥的發(fā)展。在癌基因中，KRAS突變可能是人類癌癥中最普遍的,其編碼一種名為Kras的小GTP酶。Kras突變發(fā)生在大約90％的胰腺癌，30％到40％的結(jié)腸癌，15％到20％的肺癌以及其他的癌癥類型中。Kras突變異常激活下游信號通路，從而有助于促進和維持癌癥惡性腫瘤。與其他成功的抗腫瘤靶向抑制劑不同，盡管經(jīng)過數(shù)十年的努力，臨床上仍缺乏針對突變Kras藥物的開發(fā)。目前，開發(fā)Kras^G12C特異性抑制劑的進展雖然帶來了希望，但尚無有效的針對Kras^G12D的抑制劑。需要指出的是，一般情況下，Kras^G12D比Kras^G12C發(fā)生的頻率更高。

胰腺癌是惡性程度非常高的腫瘤，其5年生存率低于10％。手術(shù)和輔助行化療是目前最主要的治療手段。同時，胰腺癌患者對靶向治療或免疫治療不獲益。因此，開發(fā)新的治療手段對與提高胰腺癌患者的預后非常重要。在胰腺癌中，Kras的突變常常發(fā)生，其突變頻率為90％左右。

Kras突變是一種功能激活型突變，是驅(qū)使胰腺癌惡性化的一個重要因素。Kras突變中又以第12位氨基酸G突變位D為主(Kras^G12D)，其次是Kras^G12V和Kras^G12C。因此，Kras^G12D是胰腺癌中潛在的一個重要的治療靶點。

目前臨床上，開發(fā)針對Kras^G12C的抑制劑在肺癌中的取得了重要進展，但是以Kras^G12D作為靶點的治療仍然缺乏。目前靶向Kras^G12D的策略是基因編輯或者敲低。比如，基于CRISPR-Cas9，或者siRNA都被報道可以靶向突變Kras^G12D的并且在體內(nèi)體外抑制Kras^G12D腫瘤包括胰腺癌的惡行進展。然而，這些現(xiàn)存的手段都面臨一個嚴重的問題，即脫靶效應。脫靶效應可能造成嚴重的副作用，因此大大限制了其在臨床中的應用。因此，開發(fā)新的靶向突變Kras^G12D的方法對與胰腺癌的臨床治療具有極其重要的意義。

目前，具有轉(zhuǎn)錄組編輯能力的CRISPR-Cas13家族的蛋白顯示出很好的應用潛力。但是，CasRx是否能被用來靶向突變的Kras轉(zhuǎn)錄本仍然不清楚。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種靶向Kras^G12D突變轉(zhuǎn)錄本的gRNA序列、攜帶CasRx系統(tǒng)的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建方法和應用，所述的這種靶向Kras^G12D突變轉(zhuǎn)錄本的gRNA序列、攜帶CasRx系統(tǒng)的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建方法和應用要解決現(xiàn)有技術(shù)中的藥物對于以Kras^G12D作為靶點的治療效果不佳的技術(shù)問題。