[發明專利]一種大麥條紋病病菌的保存方法、共培養濾紙片

在審

• 申請號: 202010773405.4
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111849788A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 姚強;胡章薇;楊帆;郭青云;閆佳會;侯璐;嚴浩浩
• 申請（專利權）人: 青海省農林科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/04;C12M1/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

本發明屬于植物病原菌保存技術領域，公開了一種大麥條紋病病菌的保存方法、共培養濾紙片；從大麥及青稞主要種植地區采集大麥條紋病典型病株標樣，通過室內組織分離法從標樣中分離出致病菌；制作滅菌濾紙片與病原菌置于PDA培養基平板上進行共同培養，直至病原菌菌落長滿培養皿；將收集得到的濾紙片置于滅菌后的硫酸紙袋中，在室溫條件下進行脫水干燥后，放置于?20℃冰箱中進行保存，提高病原菌的保存時間。本發明制作的無菌濾紙片無需裁剪，減少培養基暴露時間，有效減少污染并且節省時間，經實驗驗證表明本發明可有效保存麥類核腔菌一年以上，保存所需空間小，保存時間長，活化效率高，也無需多次傳代以致其活力降低。

技術領域

本發明屬于植物病原菌保存技術領域，尤其涉及一種大麥條紋病病菌——麥類核腔菌(Pyrenophora graminea)的保存方法、共培養濾紙片。

背景技術

目前，大麥條紋病病菌的分生孢子梗3～5個叢生。梗基部膨大，灰色至欖褐色，大小90～180×7.5～12(μm)。梗上頂生或側生1～4個分生孢子，直或略彎，基部常較上端略寬，基細胞呈半球形.大小50～125×14～22.5(μm)，具隔膜1～7個。表面光滑，臍部寬3～6μm。次生分生孢子梗及分生孢子較常見。幼苗染病，1、2片幼葉即可發病，但4～5片葉以后發生較多。初生淺黃色斑點或短小的條紋，后隨葉片生長，病斑逐漸擴展。分蘗期形成與葉脈平行的細長條紋，病斑由黃色變為褐色。至拔節抽穗期，多數病斑中部草黃色，邊緣褐色；濕度大的長出黑色霉層；即病原菌分生孢子梗和分生孢子。病株提前枯死或矮小，不能抽穗或彎曲畸形.不能結實或不飽滿。

從典型病葉組織中分離病原菌，將滅菌后的濾紙片(4.5mm×4.5mm)與病原菌在PDA培養基平板上共同培養，直到菌落長滿培養皿，收集得到濾紙片于滅菌2次的硫酸紙袋中，室溫條件下脫水干燥2～3d后，放置于-20℃冰箱中保存。

綜上所述，現有技術存在的問題是：

(1)現有的濾紙片需要自行裁剪。

(2)現有的濾紙片置于培養基上需一一逐個放上去非常耗時且易污染。

(3)現有的菌絲較為致密，容易遮擋濾紙，難以準確收集，耗時且易將瓊脂混入。

(4)現有的共培養后的濾紙片含有水分易粘連，再次活化時不易取出單片，易污染。

解決上述技術問題的難度：保存病原菌期間應該尋找一些簡便、保存時間長、污染少且耗時短的方法，本發明根據現有方法將濾紙片進行改進，可大大縮短機械操作時間，以及減少菌種暴露在空氣中的時間，菌種保存過程更為便利、快捷。

解決上述技術問題的意義：培養皿直徑為9cm，傳統濾紙直徑為9cm，本發明濾紙片直徑為8cm，濾紙無需自行裁剪且大小均勻；濾紙無需耗時單個放入培養基中；在菌絲即將長滿時濾紙邊緣尚能看見時，整片揭起，省時且方便；再次活化時可從濾紙片背面清晰看見虛線，沿虛線輕輕拉扯即可取出一片直徑為7mm的濾紙片用于活化。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種大麥條紋病病菌的保存方法、共培養濾紙片。

本發明是這樣實現的，一種大麥條紋病病菌的保存方法，所述大麥條紋病病菌的保存方法包括以下步驟：

第一步，從大麥及青稞主要種植地區采集大麥條紋病典型病株標樣，通過室內組織分離法從標樣中分離出致病菌；

第二步，將滅菌的濾紙片與病原菌在PDA培養基平板上22℃共同培養，直到致病菌菌落長滿培養皿(如果培養基較硬或放置時間過久，適量加入無菌水，以保證濾紙片緊貼培養基)；

第三步，收集濾紙片于滅菌的硫酸紙袋中，室溫條件下脫水干燥后，放置于-20℃冰箱中長期保存。

進一步，所述第二步的濾紙片為圓形，直徑為8cm。