[發(fā)明專利]病毒保存液、試劑盒以及病毒RNA的超靈敏檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010773119.8
• 申請(qǐng)日: 2020-08-04
• 公開（公告）號(hào): CN111876467A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 聶棱;黃小浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳柏悅基因科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 北京睿陽(yáng)聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11758
• 代理人: 郭奧博;張穎

1.一種病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液中含有4～6.5M胍鹽，0.5-2％N-月桂酰基肌氨酸以及0.2～1M檸檬酸鈉。

2.一種用于病毒RNA提取的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的病毒保存液；

優(yōu)選地，所述試劑盒中還包括：內(nèi)含過濾柱的離心管，納米磁珠，結(jié)合緩沖液，清洗緩沖液，50～80％乙醇以及洗脫液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述結(jié)合緩沖液中包含無(wú)水乙醇或異丙醇；

和/或，所述清洗緩沖液包括清洗緩沖液I和清洗緩沖液II；其中，所述清洗緩沖液I包含1～2M胍鹽以及50～80％乙醇，所述清洗緩沖液II包含50～80％乙醇。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括的病毒保存液與結(jié)合緩沖液的體積之比為(3～7)：(2.5～3.5)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括的納米磁珠質(zhì)量與所述結(jié)合緩沖液的體積之比為(1.5mg～4mg)：300ul，優(yōu)選為2mg：300ul。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括的病毒保存液、結(jié)合緩沖液以及洗脫液的體積之比為(30～70)：(25～35)：(3～7)。

7.權(quán)利要求1所述病毒保存液或權(quán)利要求2～6任意一項(xiàng)所述試劑盒在病毒RNA提取和/或檢測(cè)中的應(yīng)用；

優(yōu)選地，待提取或檢測(cè)的病毒樣本為人體咽拭子采樣所獲得的單獨(dú)樣本，或者多組人體咽拭子采樣所獲得的樣本混合后的混合樣本。

8.一種病毒RNA的超靈敏檢測(cè)方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1所述病毒保存液或權(quán)利要求2～6任意一項(xiàng)所述試劑盒，包括如下步驟：將待提取的病毒樣本置于所述病毒保存液中保存；對(duì)保存的病毒樣本進(jìn)行RNA提取，再進(jìn)行檢測(cè)；

優(yōu)選地，待提取或檢測(cè)的病毒樣本為人體咽拭子采樣所獲得的單獨(dú)樣本，或者多組人體咽拭子采樣所獲得的樣本混合后的混合樣本。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取保存于所述保存液中的樣本溶液，置于內(nèi)含過濾柱的離心管中離心處理后，取全部濾液；

(2)在步驟(1)所得濾液中加入結(jié)合緩沖液，混勻后，加入納米磁珠；

(3)加熱混勻后，用磁鐵吸附納米磁珠，棄上清；

(4)加入清洗緩沖液，混勻后，用磁鐵吸附納米磁珠，棄上清；

(5)加入50～80％乙醇，混勻后，用磁鐵吸附納米磁珠，棄上清；

(6)加入洗脫液，混勻加熱后，用磁鐵吸附納米磁珠，將含有病毒RNA的上清液保存?zhèn)溆茫?/p>

優(yōu)選地，所述保存于所述保存液中的樣本溶液、結(jié)合緩沖液、納米磁珠和洗脫液的用量比為(300ul～700ul)：(250ul～350ul)：(1.5mg～4mg)：(30ul～70ul)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述離心為：以轉(zhuǎn)速5000rpm～13000rpm離心30s～90s；

和/或，步驟(3)所述加熱混勻?yàn)椋涸?0～60℃加熱8～20分鐘，期間每隔2～3分鐘混勻一次；

和/或，步驟(6)所述混勻加熱為：吹打混勻后，在50～80℃加熱5～10分鐘。