[發明專利]一株產制霉色基素的大別山五針松內生鏈霉菌及其制備方法

在審

• 申請號: 202010772722.4
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN114058530A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 李繼揚;彭城;安多朋;朱袁興;丁文鑫;瞿滌
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P17/08;C07D313/00;A01N63/28;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一株產制霉色基素的大別山五針松內生鏈霉菌及其發酵工藝。本發明從瀕危植物大別山五針松植物中分離到一株內生放線菌WP?1，其16S rDNA含有如序SEQ ID NO 1所示的序列，本發明還包括使用該鏈霉素生產制霉色基素的發酵工藝及其應用。本發明的鏈霉素的發酵液對植物病原菌尖孢鐮刀菌具有較好的活性作用，發酵工藝成本低、產量高，可以實現大規模工業化生產。本發明公開的WP?1鏈霉菌及其發酵代謝產物，可用于抑制西瓜枯萎病菌等多種農作物病原真菌的菌絲生長和孢子萌發，避免化學農藥的使用，為具有前途的生物農藥。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一株產制霉色基素的大別山五針松內生鏈霉菌及其制備方法。

背景技術

農作物在種植過程中經常會受到來自于細菌、真菌和病毒感染的威脅，尤其以真菌性病害最為常見，造成作物生長過程中壞死、腐爛、枯萎、變色、畸形等，嚴重影響農作物的產量和質量。目前用于防治作物真菌性病害的主要方法是化學藥劑防治法，如代森錳鋅、霜脲氰錳鋅、波爾多、百菌清、甲基硫菌靈、多菌靈、福美雙、甲霜靈、戊唑醇、乙磷鋁等，但類似上述化學藥劑防治法往往造成農作物的化學殘留、環境和食品安全的隱患等。長期使用化學藥劑防治也會加快農作物致病菌的抗藥性，如此造成惡性循環，不符合綠色農業和可持續發展的現代理念。

近年來，國內外逐步使用生物防治法控制農作物各種病害，其中主要包括利用有益微生物或微生物的發酵代謝產物來防治農作物各種病害，這些有益微生物通常包括細菌、放線菌、酵母菌甚至霉菌。實際應用中，往往利用有益微生物的活菌體或菌體的代謝產物制成粉劑、顆粒劑、液劑、懸浮劑或含菌肥料等，防治農作物真菌性病害，并取得了明顯的防治效果和環境改善效應。其主要原理在于：有益微生物制劑通過噴灑或澆灌在自然條件下可以大量的繁殖，從而與植物病原菌形成占位及營養競爭，甚至分泌代謝產物，直接殺死植物病原菌或誘導植物對病原菌產生抗性；有些有益微生物還可產生植物生長刺激素、維生素等活性物質促進植株生長，增加作物產量。這些微生物源產品的優點是對人、動物和有益昆蟲毒性低、室外環境降解快、殘留小、有利于綠色農業和可持續發展。當前該領域用于防治農作物真菌性病害的產品主要有枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟質芽孢桿菌、木霉菌等微生物活菌體制劑；微生物的代謝產物制劑也普遍推廣使用，如用井岡霉素水劑(或可濕性粉劑)防治水稻紋枯病、春雷霉素水劑(或可濕性粉劑)防治水稻稻瘟病、多抗霉素水劑(或可濕性粉劑)防治小麥根腐病、武夷霉素水劑(或可濕性粉劑)防治黃瓜白粉病、中生菌素水劑(或可濕性粉劑)防治蘋果腐爛病等。由于農作物品種繁多，病害復雜，可用于生物防治的品種數量還十分有限，另外也存在有些品種藥效緩慢或藥效不明顯等缺陷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新的高效防治農作物真菌性病害的鏈霉菌。

本發明的另一目的在于提供一種優化的發酵工藝，提高上述鏈霉菌代謝產物的產量，以實現工業化生產。

本發明提供了一株鏈霉菌，結晶紫染色后在光學顯微鏡下觀察插片上菌株的基內菌絲、氣生菌絲、孢子及孢子絲的形態。如圖2所示，放線菌的菌落早期絨狀，后期菌落呈粉狀、干燥，有淡黃色色素沉積呈同心圓放射狀；菌落表面為淺灰白色，并伴有較濃土腥味道；基內菌絲無橫隔，分枝多；氣生菌絲呈現直或者彎曲，有橫隔，呈現明顯的結節狀。

所述鏈霉菌的16S rDNA含有如SEQ ID NO 1所示的序列。

本發明提供了一種新的高效防治農作物真菌性病害的鏈霉菌，該鏈霉菌是從中國特有的瀕危植物大別山五針松樹皮中分離得到，已于2020年1月15日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏號：CGMCC NO.19354。結合菌株生長的形態特征和16S rDNA序列分析，該菌屬于鏈霉菌(Streptomyces sp)，該菌株命名為Streptomyces sp WP-1。

本發明提供了所述的鏈霉菌的制備方法，包括：