[發明專利]一種重樓藥材的炮制工藝

有效

• 申請號: 202010772686.1
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111840449B
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 邢彥;吳哲
• 申請（專利權）人: 安徽鑫泰藥業有限公司
• 主分類號: A61K36/896
• 分類號: A61K36/896;A61K125/00
• 代理公司: 蕪湖思誠知識產權代理有限公司 34138
• 代理人: 項磊

本發明公開了高品質重樓藥材的炮制工藝，涉及滇重樓炮制領域，本發明包括接種塊制備、低齡塊莖打孔，富集接種培養，切片干制等步驟，本發明將滇重樓內生菌在低齡滇重樓塊莖內進行人工原位富集培養，促進低齡滇重樓塊莖內的皂苷活性物質快速富集，有效提高了低齡滇重樓塊莖內的皂苷含量，提升藥用價值，大幅縮短了滇重樓藥材的生產周期。

技術領域

本發明涉及滇重樓炮制領域，特別涉及高品質重樓藥材的炮制工藝。

背景技術

滇重樓為百合科重樓屬植物云南重樓的干燥根莖，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚的功效。其主要的活性成分為重樓皂苷，約占總化合物數目的80％，但重樓皂苷含量不僅受地理環境、土壤和氣候的影響而存在差異，不同的加工炮制方法同樣會影響重樓皂苷含量。

滇重樓中有益內生菌可與宿主植物產生互利效應，宿主植物因此受到很多影響，包括能產生甾體皂苷類化合物、增強滇重樓的抗病能力、抵御生長環境脅迫能力、提高滇重樓產率、轉化或修飾滇重樓中活性次生代謝產物。王茜等的研究顯示：從滇重樓塊莖、根、葉中分離得到749株內生真菌，分別歸屬于41個屬，其中尖孢鐮刀菌、粘鞭霉屬和曲霉屬能產甾體皂苷的活性菌[GUO L D,HYDE K D,LIEW E C.Detection and taxonomicplacementof endophytic fungi within frond tissuesof Livistona chinensis based on rDNAsequences[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2001,20(1):1.DOI:10.1006/mpev.2001.0942.]；也有研究顯示，重樓內生菌能夠促進滇重樓甾體皂苷的積累[李艷冰,劉濤,林亮,et al.促進滇重樓皂苷類活性成分積累的內生真菌篩選[J].云南農業大學學報:自然科學版,2019.]。

近年來隨著滇重樓藥用價值的深度開發利用，藥用范圍不斷擴大，現有藥源已遠不能供應市場需求。野生資源有限加之生長周期較長，地下塊莖的生長速度十分緩慢，需歷經多年的生長累積，才能使種子生長為具有藥用價值的成苗。因此，如何擴大藥用滇重樓的產能及品質成為當務之急。

發明內容

本發明所要解決的技術問題：如何利用重樓內生菌提高低齡滇重樓塊莖中的活性皂苷含量，進而炮制獲得高皂苷含量的重樓飲片。

為解決上述技術問題，本發明提供以下的技術方案：

高品質重樓藥材的炮制工藝，包含如下具體步驟：

(1)將新鮮的2～4年生低齡滇重樓塊莖收獲后去除泥土，清水洗凈，外部徹底消毒后備用；

(2)將十年生的滇重樓塊莖消毒切塊后，無菌條件下接種于PDA培養基中，無菌條件下富集培養，切取柱狀內生菌富集培養物作為內生菌接種塊；

(3)無菌操作條件下，在消毒后的低齡滇重樓塊莖上打若干接種孔，將內生菌接種塊填入接種孔中，無菌濾紙貼合封閉孔口；

(4)將接種后的低齡滇重樓塊莖置于恒溫恒濕黑暗環境下無菌培養15～50天得富集塊莖；

(5)將富集塊莖切片后直接脫水干制即得重樓飲片。

優選地，所述步驟(1)和(2)中的消毒步驟具體為：采用75％乙醇浸泡消毒1min，無菌水沖洗三次，100～200ppm次氯酸鈉浸泡消毒4min,無菌水沖洗4次，接著用無菌水浸泡30min，后用100～200ppm次氯酸鈉消毒處理2min，無菌水沖洗4次，用無菌濾紙吸干水分待用。

優選地，所述PDA培養基為含150mg/L的硫酸鏈霉素和150mg/L鹽酸四環素的雙抗PDA培養基。

優選地，所述步驟(2)中將消毒處理后的塊莖用解剖刀切成3cm見方的正方體，置于 PDA培養基平板內，28℃，培養4～8d，待正方體上及周邊長滿菌絲后，在正方體邊緣切取柱狀塊。