[發(fā)明專利]一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌及其分離應(yīng)用方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010772256.X | 申請日： | 2020-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN112358977B | 公開（公告）日： | 2023-05-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王琳;劉蓓;孫靜;邵明明;梁曉萍;韓文霞;武永紅;賀紅艷;周瑾昱 | 申請（專利權(quán)）人： | 西安醫(yī)學(xué)院 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/02;C05F11/08;C05G3/00;C05G3/60;C12R1/41 |
| 代理公司： | 西安弘理專利事務(wù)所 61214 | 代理人： | 王丹 |
| 地址： | 710021*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 具有 作用 苜蓿 根瘤菌 及其 分離 應(yīng)用 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌，分類命名為苜蓿根瘤菌屬SA?17(Sinorhizobium?SA?17)，于2020年7月10日由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC?No：M2020300，本發(fā)明還公開了一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌的分離方法和應(yīng)用方法，本發(fā)明苜蓿根瘤菌不同于現(xiàn)有的氫氧化細(xì)菌，豐富了氫氧化細(xì)菌資源，能夠促進(jìn)植物生長。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于土壤微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌及其分離應(yīng)用方法。
背景技術(shù)
在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)系統(tǒng)中利用植物根際促生菌(plant?growth-promotingrhizobacteria，PGPR)已經(jīng)成為了目前一種主流的思想，因為它在植物生長調(diào)節(jié)和應(yīng)對非生物脅迫方面效率很高。這些細(xì)菌通過產(chǎn)生植物激素和相關(guān)代謝產(chǎn)物來促進(jìn)植物生長，并使植物具有應(yīng)對土壤中病害和非生物脅迫的潛力，例如改善植物與水的關(guān)系和植物的營養(yǎng)狀況，并激發(fā)防御機(jī)制來克服不利的環(huán)境條件。在豆科植物中根瘤菌與宿主植物產(chǎn)生根瘤，在根瘤中類菌體和豆科植物共建一個共生體系，形成了高度復(fù)雜的系統(tǒng)。根瘤菌把空氣中的氮氣轉(zhuǎn)化為氨，并輸出到豆科植物，這一共生機(jī)制和它帶來的經(jīng)濟(jì)效益一直是各國科學(xué)家研究的熱點。氫氣作為豆科植物固氮過程中釋放的副產(chǎn)物，對于根際促生菌具有十分重要的影響，對于能夠利用氫氣作為電子供體，二氧化碳作為唯一能源的這一類細(xì)菌稱為氫氧化細(xì)菌。
在農(nóng)耕生活中，人們發(fā)現(xiàn)豆科植物的輪作間作可以起到增產(chǎn)的作用，在這些豆科植物的根際土壤中分離篩選氫氧化細(xì)菌。許多研究發(fā)現(xiàn)分離的氫氧化細(xì)菌產(chǎn)IAA，產(chǎn)鐵載體，產(chǎn)ACC脫氨酶等能力都較高，且一些盆栽實驗證明植物的穗長，株長也確實有增加。作為豆科植物根際土壤微生物一類特殊的種群，研究此類微生物對農(nóng)業(yè)的發(fā)展具有重要的價值。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的是提供一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌，不同于現(xiàn)有的氫氧化細(xì)菌，豐富了氫氧化細(xì)菌資源，能夠促進(jìn)植物生長。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌的分離方法。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌的應(yīng)用方法。
本發(fā)明所采用的第一技術(shù)方案是，一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌，分類命名為中華根瘤菌SA-17(Sinorhizobium?sp.SA-17)，于2020?年7月10日由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏地址：中國武漢保藏編號為CCTCC?NO：M2020300。
本發(fā)明的技術(shù)特征還在于，
苜蓿根瘤菌能夠在礦質(zhì)鹽培養(yǎng)基上形成乳白色的圓形菌落。
苜蓿根瘤菌的個體形態(tài)是桿狀，革蘭氏染色為陰性。
本發(fā)明所采用的第二技術(shù)方案是，一種具有促生作用的苜蓿根瘤菌的分離方法，包括以下步驟：
步驟1，樣品采集，采集生長旺盛且不含吸氫酶的結(jié)瘤豆科植物根際土壤；
步驟2，土壤富集，將采集的根際土壤置于持續(xù)通H2的培養(yǎng)裝置中，富集土壤中的苜蓿根瘤菌；
步驟3，菌種分離與純化，將土壤稀釋涂布于礦質(zhì)鹽培養(yǎng)基的平板表面，置入密閉容器中，室溫倒置培養(yǎng)，待平板上長出明顯菌落，挑取單菌落用稀釋涂布法進(jìn)一步純化，獲得純化后菌落；
步驟4，菌種篩選，采用氣相色譜儀對純化后菌落進(jìn)行檢測，并篩選出其中的苜蓿根瘤菌種。
步驟1中，不含吸氫酶的結(jié)瘤豆科植物包括紫花苜蓿、大豆、紫云英和三葉草，采集根際土壤的范圍是距離根瘤5mm以內(nèi)。
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