[發(fā)明專利]催化生物陶材料從含目的蛋白的樣品中去除病毒的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010772122.8
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111647075A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 汪濤;嚴娜;曹憶;周潔;殷夢琪;錢星;孫莉潔
• 申請（專利權）人: 蘇州良辰生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22;C04B41/85;C04B38/00;C04B35/14
• 代理公司: 南京蘇博知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 32411
• 代理人: 陳婧

本發(fā)明公開了一種催化生物陶材料從含目的蛋白的樣品中去除病毒的方法，利用多孔陶瓷顆粒制備成的正電荷多孔陶瓷顆?？梢栽趯游鲞^程中特異性的吸附含病毒單克隆抗體溶液中的帶負電荷的病毒顆粒，去除效果達到了6logs以上，而且單克隆抗體溶液的蛋白濃度未降低，達到了很好的病毒去除效果，比現(xiàn)有的先經(jīng)過陰離子層析或親和層析再加入納濾去除病毒的方法，節(jié)約時間及納濾耗材，并且蛋白溶液在層析設備及納濾設備上總體時間大大減少，蛋白溶液的活性降低及總量增加。

技術領域

本發(fā)明涉及生物制品安全性領域，尤其涉及一種催化生物陶材料從含目的蛋白的樣品中去除病毒的方法。

背景技術

治療用生物制品是指采用不同表達系統(tǒng)的工程細胞（如細菌、酵母、昆蟲、植物和哺乳動物細胞）所制備的蛋白質、多肽及其衍生物，包括細胞因子、纖維蛋白溶解酶原激活因子、重組血漿因子、生長因子、融合蛋白、酶、受體、激素和單克隆抗體等。以上目的蛋白（主要是單克隆抗體）包括細胞外分泌或細胞內(nèi)表達為主，且需要一系列的分離目的蛋白與各種雜質，例如細胞碎片，宿主細胞內(nèi)蛋白、酶類、核酸物質等。目前在生產(chǎn)中的應用主要包括一個或者多個層析步驟來清除以上雜質。典型的單克隆抗體純化方法一般為三步：首先利用親和層析捕獲培養(yǎng)收獲液中的目的蛋白，再利用兩步驟離子交換層析或者離子交換加疏水層析進行精細純化。一般來說每個步驟都具有一定量的病毒去除效果，但是通常情況下不能完全去除掉病毒。因此，在生產(chǎn)工藝中一般都會加入一步額外的純化步驟（納米過濾）來保證病毒的完全去除。但是利用現(xiàn)有的層析步驟和納米過濾步驟可以確保單克隆抗體中的病毒完全被去除，但是損耗的時間成本以及材料成本巨大，并且單克隆抗體在工藝中的處理時間越長，蛋白的活性成分損失越高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種催化生物陶材料從含目的蛋白的樣品中去除病毒的方法，旨在解決利用現(xiàn)有的層析步驟和納米過濾步驟可以確保單克隆抗體中的病毒完全被去除，但是損耗的時間成本以及材料成本巨大，并且單克隆抗體在工藝中的處理時間越長，蛋白的活性成分損失越高的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種催化生物陶材料從含目的蛋白的樣品中去除病毒的方法，包括：

對硅藻土多孔陶瓷顆粒進行預處理后室溫干燥；

將干燥后的硅藻土多孔陶瓷顆粒浸泡在用NaOH和YCl₃·6H₂O制備成的溶膠體溶液中，超聲波涂膜反應0.5小時，置于100℃干燥箱中干燥，Y為釔；

重復上述操作三次后，再置于馬弗爐中干烤700℃并保溫1小時，制備得到正電荷多孔陶瓷顆粒；

通過篩網(wǎng)篩選正電荷多孔陶瓷顆粒；

將篩選后的正電荷多孔陶瓷顆粒在空層析柱中裝柱；

制備單克隆抗體樣本模擬溶液，所述單克隆抗體樣本模擬溶液包括牛血清白蛋白標準溶液和病毒，其中，所述牛血清白蛋白標準溶液和所述病毒的比例為500:1，所述病毒為鼠細小病毒或呼腸孤病毒3型；

將所述單克隆抗體樣本模擬溶液流穿由正電荷多孔陶瓷顆粒為填料的層析柱；

收集流穿液、沖洗液、洗脫液、清洗液，分別測定其中的滴度。

在一實施方式中，在將篩選后的正電荷多孔陶瓷顆粒在空層析柱中裝柱之中，所述空層析柱的直徑為1cm~1.5cm，顆?；氐奶畛涿芏葹?.5kg/l。

在一實施方式中，將篩選后的正電荷多孔陶瓷顆粒在空層析柱中裝柱，具體包括：

取10ml沉降的正電荷多孔陶瓷顆粒加入到空層析柱中；

用50ml去離子水進行沖洗至平衡。

在一實施方式中，用50ml去離子水進行沖洗至平衡之后，所述方法還包括：