[發(fā)明專利]Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株、滅活疫苗及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010772052.6
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111778217B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 揭鴻英;于漾;畢志香;趙陽;朱亞露;何家惠;侯繼波
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/235;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發(fā)明提供Ⅰ群4型禽腺病毒SD?F株、滅活疫苗及制備方法，屬于生物工程領(lǐng)域。Ⅰ群4型禽腺病毒SD?F株，保藏編號：CCTCC NO：V201964。該禽腺病毒滅活疫苗的制備方法如下：將Ⅰ群4型禽腺病毒SD?F株病毒液滅活，然后與吐溫?80混合，攪拌混勻，得到水相；將白油與司本?80混合，攪拌均勻，滅菌后得到油相；將水相與油相按體積比為1:2?4混合，乳化，即得滅活疫苗。本發(fā)明SD?F株能夠適應(yīng)無致瘤性的DF?1細胞，制備工藝簡單，成本低，無致瘤風險，安全性較高；其滅活疫苗免疫保護率高，免疫后9天抗體陽性率達90%以上，免疫持續(xù)期達到6個月，且子代攻毒保護率為90%以上，攻毒保護率為100%。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種禽腺病毒蝕斑克隆純化毒株，滅活疫苗及制備方法，屬于生物工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)

禽腺病毒為新近流行的急性接觸性傳染病，感染在雞群中較為普遍，甚至呈全國性流行，且呈逐年上升趨勢。該病主要垂直傳播，也可水平傳播，雞感染后，可成為終身攜帶者，并可間歇性排毒。發(fā)病的宿主范圍越來越廣，白羽肉雞、蛋雞、黃羽雞均可感染發(fā)病。此病死亡率為20％～80％，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。由于本病為新發(fā)病，商品化疫苗極少，而控制本病，最有效的方法就是免疫預(yù)防。目前禽腺病毒4型主要是通過SPF雞胚進行病毒增殖，或用致瘤性的LMH細胞增殖。用雞胚增殖在大規(guī)模生產(chǎn)中，工藝繁瑣、成本昂貴，用致瘤性的LMH雖然可以增殖，但LMH細胞有致瘤性，給疫苗生產(chǎn)造成潛在的致瘤風險，從而嚴重阻礙禽腺病毒疫苗的研究進程。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株，該毒株能夠適應(yīng)無致瘤性的DF-1細胞，制備工藝簡單，成本低，無致瘤風險，安全性較高。

本發(fā)明的再一目的是提供采用上述Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株制備的禽腺病毒滅活疫苗，安全性、免疫保護率高，免疫后9天抗體陽性率達90％以上，免疫持續(xù)期達到6個月，且子代攻毒保護率為90％以上。

本發(fā)明的另一目的是提供上述滅活疫苗的制備方法，由于Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株采用無致瘤性的DF-1細胞進行增殖，因此安全性高，操作簡單，成本低。

本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)：

Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株，保藏編號：CCTCC NO：V201964。

本發(fā)明提供一種禽腺病毒滅活疫苗，抗原為滅活的Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株，該SD-F株的保藏編號為CCTCC NO：V201964。

本發(fā)明還提供所述禽腺病毒滅活疫苗的制備方法，包括如下步驟：

(1)將Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株病毒液滅活，然后與吐溫-80混合，攪拌混勻，得到水相；

(2)將白油與司本-80混合，攪拌均勻，滅菌后得到油相；

(3)將水相與油相按體積比為1:2-4混合，乳化，即得Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株滅活疫苗。

在本發(fā)明中，步驟(1)中所述病毒液采用DF-1細胞測定病毒含量不低于10^5.5TCID₅₀/ml。

在本發(fā)明中，步驟(1)中所述病毒液是將Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株采用DF-1細胞增殖后獲得。

在本發(fā)明中，步驟(1)中滅活后的病毒液中甲醛的體積百分含量為0.15％-0.2％。

在本發(fā)明中，步驟(1)中滅活后的病毒液與吐溫-80的體積比為94:6。

在本發(fā)明中，步驟(2)中白油與司本-80的體積比為94:6。