[發(fā)明專利]抗體、其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010770583.1
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111647085B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李俊;張鵬潮
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州方德門達新藥開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K16/36
• 分類號: C07K16/36;C12N15/85;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州謹和知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32295
• 代理人: 葉棟

本發(fā)明涉及一種抗體、其制備方法和應(yīng)用，所述抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗體的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。該抗體的靈敏度和特異性均能滿足檢測需求，且生產(chǎn)成本低，可大規(guī)模應(yīng)用于檢測試劑盒，對人疾病早期的快速診斷具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗體、其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

人體內(nèi)的纖維蛋白原在纖溶系統(tǒng)激活后產(chǎn)生的纖溶酶的作用下，降解形成Bβ1～42肽鍵，A、B、C、H極附屬物以及X、Y、D、E碎片，稱為纖維蛋白原降解產(chǎn)物（FgDP）。

人體內(nèi)的纖維蛋白原α（A）鏈和β（B）鏈在凝血酶的作用下，先后釋放出纖維蛋白肽A（FPA）和肽B（FPB），剩余部分分別稱為纖維蛋白Ⅰ（Fb-Ⅰ）和纖維蛋白Ⅱ（Fb-Ⅱ）。在纖溶酶的作用下，F(xiàn)b-Ⅰ被降解成Bβ1～42肽鍵，A、B、C、H極附屬物以及X'、Y'、D、E'碎片，F(xiàn)b-Ⅱ被降解成Bβ15～42肽鍵，A、B、C、H極附屬物以及X'、Y'、D、E'碎片；同時Fb-Ⅰ和Fb-Ⅱ可自行聚合成可溶性纖維蛋白單體聚合物（sFMC）。在FXⅢa和Ca2⁺作用下，F(xiàn)b-Ⅰ和Fb-Ⅱ形成交聯(lián)纖維蛋白；在纖溶酶作用下，交聯(lián)的纖維蛋白除降解產(chǎn)生碎片X'、Y'、D和E'外，還生成D-二聚體（D-Dimer，DD）等。

D-二聚體反映受檢者體內(nèi)凝血-纖溶系統(tǒng)活化狀況，與多種疾病密切相關(guān)。在臨床檢測過程中，它們受到諸多因素的影響，常會造成假陽性或假陰性的結(jié)果，而降低臨床應(yīng)用的敏感性和特異性，直接影響臨床的診斷。

因此，一種高效的檢測D-二聚體的抗體對于疾病早期的快速診斷具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種抗體、其制備方法和應(yīng)用，其靈敏度和特異性均能滿足檢測需求，對人疾病早期的快速診斷具有重要意義。

為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種抗人D-二聚體抗體，所述抗人D-二聚體抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗人D-二聚體抗體的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述抗體作用的抗原為人D-二聚體。

進一步地，所述重鏈可變區(qū)具有三個高變區(qū)：HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

進一步地，所述輕鏈可變區(qū)具有三個高變區(qū)：LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

本發(fā)明還提供一種制備所述的抗人D-二聚體抗體的方法，所述制備方法包括以下步驟：

S1、以人D-二聚體來使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，得到免疫小鼠；

S2、將所述免疫小鼠的脾臟細胞和骨髓瘤細胞進行融合，得到雜交瘤細胞；

S3、對所述雜交瘤細胞進行篩選分離，得到抗人D-二聚體抗體的雜交瘤細胞株；

或者，包括以下步驟：

S1’、提供攜帶編碼所述抗人D-二聚體抗體的DNA的宿主細胞；

S2’、逆轉(zhuǎn)錄所述宿主細胞的總RNA，得到cDNA；

S3’、以所述cDNA為模板，通過PCR擴增得到所述抗人D-二聚體抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的DNA序列；

S4’、通過DNA重組得到插入了所述重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的DNA序列的表達載體；

S5’、通過基因轉(zhuǎn)染將所述表達載體轉(zhuǎn)染CHO細胞。