[發明專利]一種包含肽標簽的融合蛋白

有效

• 申請號: 202010768943.4
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111875697B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 靳維維;于聰;陳濱
• 申請（專利權）人: 杭州皓陽生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K19/00
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 李品

本發明提供一種肽標簽在純化融合多肽中的用途，所述肽標簽序列與融合多肽連接，用于融合多肽的篩選及純化，所述融合多肽包含CTLA4胞外區和抗CD73抗體的融合多肽及含有該蛋白的藥物組合物。

技術領域

本發明涉及大分子領域，特別地涉及一種包含肽標簽的融合蛋白。

背景技術

肽標簽在體內或體外都能被生物素連接酶在賴氨酸殘基連接上一個生物素，從而實現蛋白的生物素化。而抗生物素蛋白或鏈霉親和素可以專一地與生物素結合，正是基于這兩個反應，肽標簽技術可以應用于蛋白的固定、純化和顯影等。借助肽標簽技術基本上所有的蛋白質都能被有效的、特異性地標記上。

細胞毒T淋巴細胞相關抗原4(Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4,CTLA4)，又名CD152，是一種白細胞分化抗原。CTLA4和CD28的配體均為B7分子，而CTLA4與B7分子結合后誘導T細胞無反應性，參與免疫反應的負調節。

CD73是NT5E基因編碼的胞外-5’-核苷酸酶，蛋白分子量70KD，由葡糖基磷脂酰肌醇錨定在細胞表面形成同源二聚體，但同時也可被切割并游離于循環系統。CD73上游的CD39可以催化ATP產生腺苷單磷酸，所產生的AMP被CD73轉化為腺苷，而腺苷會結合下游的腺苷受體。有研究顯示，A2AR通過激活蛋白激酶A和Csk激酶，抑制LCK、MAPK、PKC等一系列與免疫激活相關的信號通路，從而發揮免疫抑制作用。

聯合給藥需要依次注射兩種或多種抗體，或將抗體做成同一種劑型。然而，一方面依次注射抗體會降低患者的治療依從性，另一方面，由于不同抗體的物化性質存在差異，很難或幾乎不太可能將不同抗體做成同一種劑型。鑒于此仍然有必要研究一種同時阻斷B7/CD28和靶向CD73的新型治療藥物。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種包含肽標簽的融合蛋白。

本發明是以如下技術方案實現的：

一種肽標簽，所述肽標簽如SEQ ID NO.15所示，所述肽標簽序列與融合多肽連接，用于融合多肽的篩選及純化。

進一步地，所述融合多肽包含CTLA4分子胞外區和抗CD73抗體。

進一步地，所述融合多肽的結構為信號肽-人CTLA4-連接肽-抗CD73抗體。

進一步地，所述抗CD73抗體包含：

CDR-L1如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，和

CDR-L2如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，和

CDR-L3如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，和

CDR-H1如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，和

CDR-H2如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，和

CDR-H3如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。

進一步地，所述抗CD73抗體包含抗體重鏈可變區氨基酸序列包括如SEQ ID NO:8所示或與SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的VH序列；所述抗CD73抗體包含抗體輕鏈可變區氨基酸序列包括如SEQ ID NO:11所示或與SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的VH序列。

進一步地，所述抗CD73抗體包含抗體重鏈可變區氨基酸序列包括如SEQ ID NO:9所示或與SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的VH序列；所述抗CD73抗體包含抗體輕鏈可變區氨基酸序列包括如SEQ ID NO:12所示或與SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的VH序列。