[發明專利]一種B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010768482.0
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111939248A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 王增福;李躍;魏杰;吳宗學;趙成全;程海波;李海鷹;倪嬌;史張艷
• 申請（專利權）人: 乾元浩生物股份有限公司
• 主分類號: A61K39/102
• 分類號: A61K39/102;A61K39/39;A61P31/04;C12N15/31;C07K14/285
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

本發明涉及一種B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗及其制備方法和應用，具體采用B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210基因的Region2(B?HMTp210?R2)為免疫原制備B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗，并對其核苷酸序列進行了優化。本發明將優化后的核苷酸序列克隆到PET?30a表達載體中并轉化BL21宿主菌，使得B?HMTp210?R2的可溶表達量顯著提高2倍以上，并且穩定性顯著提升。本發明據此制備得到的B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗具有較高的安全性和免疫效果，能夠快速誘導免疫動物產生高水平的中和抗體，實現B型雞傳染性鼻炎的高效免疫保護。本發明的亞單位疫苗的制備過程簡單，成本低廉，易于大規模生產。

技術領域

本發明涉及獸用生物制品領域，具體涉及一種B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

雞傳染性鼻炎(Avian infectious coryza)是由副雞禽桿菌(Avibacteriumparagallinarum，Apg)感染引起的一種雞急性上呼吸道傳染病。目前該病在雞養殖領域已引起多種問題，特別是對蛋雞的生產性能造成很大的影響。該病主要造成育成雞生長不良和產蛋雞產蛋明顯下降，并可使肉雞淘汰率明顯升高，造成很大的經濟損失。

副雞禽桿菌為巴氏桿菌科的一種短小革蘭氏陰性桿菌，Page等人將副雞禽桿菌分為A、B和C三種血清型，后由研究表明A、B、C三個血清型的副雞禽桿菌對雞均有不同程度的致病力，且三種血清型之間交叉免疫保護力較弱。隨著雞傳染性鼻炎等細菌病發病率的增加，臨床上大量藥物的使用等因素的影響，雞傳染性鼻炎菌株耐藥性普遍增強，藥物敏感度下降致使治療效果亦受到了較大影響，市場對傳染性鼻炎疫苗尤其是高品質疫苗的需求逐漸增加。目前市場上有二價疫苗、三價疫苗等多種防控鼻炎的疫苗產品，尤其是A、B、C全菌三價疫苗能夠對所有的鼻炎血清型提供保護，因而市場容量較大。但由于副雞禽桿菌屬于苛生菌，培養成本較高，而且全菌滅活疫苗中含有大量的菌體蛋白、內毒素、其他毒性物質以及附加物等因素，易造成較為嚴重的副反應，在接種部位還會形成局灶性壞死斑。

發明內容

為了至少解決現有技術存在的一個問題，本發明提供了一種B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗及其制備方法和應用，通過優化B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2的氨基酸序列顯著提高其表達水平和穩定性。

第一方面，本發明提供一種B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗，所述B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗的抗原成分為B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2，所述B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，編碼所述B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

進一步地，在所述B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗中，所述B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2的含量為5～50μg/mL。

進一步地，所述B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗還包括佐劑，所述佐劑包括：包括：90～100份礦物油，1～2份硬脂酸鋁，6～8份司本80。

本發明經過研究優化了B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2的核苷酸序列，優化后，HMTp210-R2蛋白的表達水平顯著提升2倍以上，穩定性也得到顯著提升，可以在低溫下至少保存6個月。

第二方面，本發明提供所述B型雞傳染性鼻炎亞單位疫苗的制備方法，包括：表達B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2，所述B型雞傳染性鼻炎外膜蛋白HMTp210-R2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，所述表達為通過將如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列連接至表達載體，轉化至宿主細胞后進行表達。

進一步地，所述表達載體為pET28、pET30、pET32中的一種或多種。

進一步地，所述宿主細胞為腸桿菌屬細菌。