[發明專利]一種人參游離小孢子誘導培養方法在審
| 申請號： | 202010764085.6 | 申請日： | 2020-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN111869566A | 公開（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發明（設計）人： | 梁江 | 申請（專利權）人： | 梁江 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00;C12N5/04 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 134299 吉林省通化市集安市東盛*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 人參 游離 孢子 誘導 培養 方法 | ||
1.一種人參游離小孢子誘導培養方法，其特征在于：包括下列步驟：
（1）花蕾的選擇、預處理和滅菌：在人參初花期，采集單核靠邊期的花蕾，并在顯微鏡下進一步確定小孢子發育時期；將花蕾保濕并置于4℃冰箱中靜置1~2d后滅菌；
（2）小孢子分離與純化：將滅菌后的花蕾用吸水紙瀝干水分后放入研缽，加入少量B5-13提取液，用研磨棒輕輕擠壓，使小孢子游離到提取液中，經400目尼龍網過濾至10ml離心管，800r/min離心3min，棄上清，沉淀物再加入少量B5-13提取液，搖勻，800r/min離心3min，重復兩次；棄上清液，所得沉淀物即為純凈小孢子；
（3）熱激預處理：將純化后的小孢子用誘導培養基重新懸浮并調整密度，分裝入直徑60mm的無菌培養皿內，每皿2.5~3.5ml，Parafilm膜封口；將培養皿置于32℃黑暗條件下培養3d；
（4）誘導培養：將熱激后的培養皿轉移至25℃黑暗條件下靜置培養，當肉眼可見胚狀體時，轉移至搖床繼續培養。
2.根據權利要求1所述的一種人參游離小孢子誘導培養方法，其特征在于：所述步驟（1）中單核靠邊期花蕾對應的長度為1.1mm-1.5mm，直徑2.1mm-2.8mm，花藥顏色為綠色或黃綠色。
3.根據權利要求1所述的一種人參游離小孢子誘導培養方法，其特征在于：所述步驟（1）中滅菌的方法為：將人參花蕾轉移入超凈工作臺無菌燒杯中，倒入70%酒精進行表面消毒，浸泡1min后倒掉酒精，再加入0.1%氯化汞溶液浸泡消毒10min，然后用無菌水沖洗3次。
4.根據權利要求1所述的一種人參游離小孢子誘導培養方法，其特征在于：所述步驟（3）中小孢子密度調整為 1.0×105~2.0×105個/ml。
5.根據權利要求1所述的一種人參游離小孢子誘導培養方法，其特征在于：所述步驟（3）中誘導培養基的配方如下：Ca（NO3）2·4H2O 430-530mg/L，KNO3 150-200mg/L，KH2PO4100-150mg/L，MgSO4·7H2O 52-76mg/L，NaCl 37-45mg/L，FeSO4·7H2O 26.4-30.2mg/L，Na2-EDTA 35.7-39.3mg/L，H3BO3 10.6-14.4mg/L，MnSO4·4H2O 20.5-24.0mg/L，ZnSO4·7H2O7.7-9.5mg/L，KI 0.5-0.6mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3mg/L，CuSO4·5H2O 0.05-0.06mg/L，CoCl2·6H2O 0.02-0.03mg/L，膽堿1.2-1.6mg/L，維生素B1 0.4-0.6mg/L，維生素B6 0.4-0.6mg/L，煙酰胺0.4-0.6mg/L，葉酸0.4-0.6mg/L，生物素0.08-0.10mg/L，L-絲氨酸70-110mg/L，甘氨酸1.0-3.0mg/L，丙酮酸鈉15-25mg/L，環腺苷酸35-45mg/L，L-谷胱甘肽20-50mg/L，肌醇60-90mg/L，H2O2 80-120μmol/L，三十烷醇0.8-1.0mg/L，2,4-D 1.4-1.6mg/L，KT 0.4-0.6mg/L，褪黑素1.8-2.2mg/L，酵母浸出物400-500mg/L，2-嗎啉乙磺酸 60-80mg/L，蔗糖120-140g/L，活性炭80-120mg/L。
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