[發(fā)明專利]一種腫瘤組織植入液及其制備方法與用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010762567.8
• 申請日: 2020-07-31
• 公開（公告）號: CN111876384B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉晗青;屠志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇萊森生物科技研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 南京智造力知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32382
• 代理人: 陳佳佳

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腫瘤組織植入液及其制備方法與用途。本發(fā)明所提供的腫瘤植入液以人尤文肉瘤細(xì)胞系RD?ES成瘤后的組織勻漿作為腫瘤微環(huán)境模擬基質(zhì)，并加入EGF、hFGF、ITS、非必需氨基酸以及L?谷氨酰胺作其他成分。其可以很好提高腫瘤組織的粘附性能，經(jīng)多種腫瘤細(xì)胞驗(yàn)證其可以大大增加人源腫瘤細(xì)胞株異種移植的成瘤成功率，對多種腫瘤模型均有很好的效果。同時(shí)，本發(fā)明所提供的制備方法簡單、成本低，易操作、對操作者要求低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腫瘤組織植入液及其制備方法與用途。

背景技術(shù)

PDX (Patient-Derived tumor Xenograft)人源腫瘤異種移植模型，是指將腫瘤患者的腫瘤組織移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，依靠小鼠提供的微環(huán)境進(jìn)行生長而建成的一種腫瘤模型。在PDX模型構(gòu)建過程中腫瘤微環(huán)境（TME）的模擬基質(zhì)組成是非常重要的因素。小鼠EHS（Engelbreth-Holm Swarm）肉瘤衍生產(chǎn)品是目前實(shí)驗(yàn)研究中最常用的腫瘤微環(huán)境模擬基質(zhì)。但是由于 EHS的分子組成不能準(zhǔn)確模擬人類TME，使得其在人源腫瘤異種移植模型建立過程中會產(chǎn)生差異，影響實(shí)驗(yàn)中對人類癌癥的侵襲過程的研究。目前商品化的EHS腫瘤衍生產(chǎn)品如Matrigel?、ECM凝膠（Sigma）、Cultrex?BME（Amsbio）、Geltrex?（Gibco）以及ECMatrix?（Millipore）等均以鼠腫瘤組織勻漿為主要成分，很難完全模擬人類腫瘤生長的自然微環(huán)境，因此，常常發(fā)生臨床前和臨床數(shù)據(jù)的不匹配，影響醫(yī)藥研發(fā)的成功率。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的主要目的是提供一種腫瘤組織植入液及其制備方法與用途。本發(fā)明的組織植入液以人尤文肉瘤細(xì)胞系RD-ES成瘤后的組織勻漿為腫瘤微環(huán)境模擬基質(zhì)，提高人源腫瘤細(xì)胞株異種移植的成瘤成功率，對多種腫瘤模型均有很好的效果。

本發(fā)明的上述目的通過如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

一方面，本發(fā)明提供了一種腫瘤組織植入液，所述的腫瘤組織植入液以人尤文肉瘤細(xì)胞系RD-ES成瘤后的組織勻漿為腫瘤微環(huán)境基質(zhì)；在一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤組織植入液還含有10~40 ng/ml表皮細(xì)胞生長因子（EGF），10~40 ng/ml成纖維細(xì)胞生長因子（hFGF），2~8 pg/ml ITS（細(xì)胞培養(yǎng)添加物），1% 非必需氨基酸和2 mmol/L L-谷氨酰胺中的一種或多種。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述的腫瘤組織植入液還含有20 ng/ml表皮細(xì)胞生長因子，20 ng/ml成纖維細(xì)胞生長因子，4 pg/ml ITS，1%非必需氨基酸和2 mmol/L L-谷氨酰胺中的一種或多種。

另一方面，本發(fā)明還提供一種腫瘤組織植入液的制備方法，其步驟包括：

（1）將人尤文肉瘤RD-ES細(xì)胞在85%RPMI-1640+15%FBS的培養(yǎng)基中常規(guī)傳代后注入小鼠皮下，當(dāng)小鼠體內(nèi)肉瘤體積達(dá)到250 mm³時(shí)取出肉瘤組織，液氮冷凍肉瘤組織后將其磨成組織粉末，多次重懸于NaCl緩沖液后，用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋成不同批次的組織液，合并組織液得到人尤文肉瘤細(xì)胞系RD-ES細(xì)胞勻漿；

（2）在步驟（1）中得到的人尤文肉瘤細(xì)胞系RD-ES細(xì)胞勻漿中加入10~40 ng/ml表皮細(xì)胞生長因子、10~40 ng/ml成纖維細(xì)胞生長因子、2~8 pg/ml ITS、1% 非必需氨基酸和/或2 mmol/L L-谷氨酰胺中的一種或多種得到腫瘤組織植入液。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，步驟（1）中所述的人尤文肉瘤細(xì)胞系RD-ES細(xì)胞勻漿的濃度為20 mg/ml。

另一方面，本發(fā)明還提供了上述腫瘤組織植入液在促進(jìn)人源腫瘤異種移植模型中的用途。

進(jìn)一步地，所述的用途為在人源腫瘤異種移植中促進(jìn)細(xì)胞的粘附。