[發明專利]微膠囊組合物及方法

在審

• 申請號: 202010761140.6
• 申請日: 2013-08-13
• 公開（公告）號: CN111748607A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 本杰明·辛德森;瑟奇·薩克森諾夫
• 申請（專利權）人: 10X基因組學有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 武晶晶

1.一種用于樣品制備的方法，其包括：

a)提供包含凝膠珠粒和核酸分析物的分區，其中所述凝膠珠粒包含與其偶聯的至少1,000,000個寡核苷酸分子，其中所述至少1,000,000個寡核苷酸分子包含共同的條形碼序列；

b)施加刺激以從所述凝膠顆粒釋放所述至少1,000,000個寡核苷酸分子，其中所述至少1,000,000個寡核苷酸分子的寡核苷酸分子在所述分區中附接至所述靶分析物；且

c)使附接至所述核酸分析物的所述寡核苷酸分子進行核酸延伸反應以獲得條形碼化的核酸產物。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述分區是微滴或孔。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述至少1,000,000個寡核苷酸分子與所述凝膠珠粒經由不穩定的部分偶聯。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述不穩定的部分是二硫鍵。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述刺激選自下組：生物刺激、化學刺激、熱刺激、電刺激、磁刺激和光刺激。

6.如權利要求5所述的方法，其中所述刺激是化學刺激，所述化學刺激是還原劑。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述還原劑是二硫蘇糖醇(DTT)或三(2-羧乙基)膦(TCEP)。

8.如權利要求1所述的方法，其中所述至少1,000,000個寡核苷酸分子的所述寡核苷酸分子包含在所述核酸延伸反應過程中作為引物發揮功能的區域。

9.如權利要求8所述的方法，其中所述作為引物發揮功能的區域具有用于隨機引發的序列。

10.如權利要求8所述的方法，其中所述引物經配置以擴增所述核酸分析物，由此產生所述條形碼化的核酸產物。

11.如權利要求1所述的方法，其中所述分區進一步包含聚合酶。

12.如權利要求11所述的方法，其中所述寡核苷酸分子包含尿嘧啶且所述聚合酶不識別尿嘧啶。

13.如權利要求1所述的方法，其中所述核酸分析物選自下組：脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、擴增子、合成的多核苷酸、多核苷酸、寡核苷酸、互補的DNA(cDNA)、雙鏈DNA(dsDNA)、單鏈DNA(ssDNA)、質粒DNA、粘粒DNA、高分子量(MW)DNA、染色體DNA、基因組DNA、病毒DNA、細菌DNA、線粒體DNA(mtDNA)、信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉移RNA(tRNA)、核RNA(nRNA)、短干擾RNA(siRNA)、小核RNA(snRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、小卡哈爾體特異性RNA(scaRNA)、微小RNA(microRNA)、雙鏈RNA(dsRNA)、核酶、核糖開關和病毒RNA。

14.如權利要求1所述的方法，其中所述至少1,000,000個寡核苷酸分子與所述凝膠珠粒經由共價鍵偶聯。

15.如權利要求1所述的方法，其中所述至少1,000,000個寡核苷酸分子可逆固定至所述凝膠珠粒。

16.如權利要求1所述的方法，其中(a)中的所述分區包含多個核酸分析物，所述多個核酸分析物包含所述核酸分析物。

17.如權利要求16所述的方法，其中所述多個核酸分析物種的每一個附接至所述至少1,000,000個寡核苷酸分子的單個寡核苷酸分子。

18.如權利要求16所述的方法，其進一步包括片段化核酸樣品以獲得所述多個核酸分析物。