[發明專利]血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法

有效

• 申請號: 202010760718.6
• 申請日: 2020-07-31
• 公開（公告）號: CN112067728B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 王海星;林函
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第二醫院;溫州醫科大學附屬育英兒童醫院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法，其特征是包括以下步驟：

1）、C18移液器吸頭固相萃取：

C18移液器吸頭內含有C18硅膠填料，包括以下步驟：

1.1）、先利用50%乙腈水溶液濕潤并激活吸頭內的C18硅膠填料，再利用1%甲酸水溶液平衡吸頭內的C18硅膠填料，得預處理后的C18移液器吸頭；

1.2）、在1 mL待測血漿中加入10 μL 50 μg /mL的丙泊酚-d₁₇內標溶液，調節pH至4±0.2，得血漿樣品；

1.3）、取100 μL血漿樣品，利用步驟1.1）所得的預處理后的C18移液器吸頭對其進行反復吸入并排出的操作；

1.4）、先用0.1%甲酸水溶液對步驟1.3）結束后的吸頭內的C18硅膠填料進行沖洗；

再以甲醇為洗脫溶劑，對吸頭內的C18硅膠填料進行洗脫，得樣品溶液；

1.5）、將樣品溶液于8±1℃離心，離心所得的上清液進行后續的液相色譜-質譜分析；

2）、液相色譜-質譜分析；

3）、將步驟2）所得的丙泊酚峰面積與丙泊酚-d₁₇峰面積的比值作為x，帶入y = 0.0588x+ 0.0053，y為待測血漿中丙泊酚的濃度，單位為μg/mL。

2.根據權利要求1所述的血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法，其特征是所述步驟2）中：

2.1）液相色譜分離：

上清液的進樣量為5μL，在分析過程中，柱溫保持在30℃；

洗脫溶劑由洗脫溶劑A和洗脫溶劑B組成，洗脫溶劑A為0.1％甲酸水溶液，洗脫溶劑B為乙腈，線性梯度洗脫的流速設置為0.4 mL /min；

色譜分離條件如下：

0.0分鐘~0.5分鐘，20％A~5％A；

0.5分鐘~2.0分鐘，5％A；

2.0分鐘~2.1分鐘，5％A~20％A；

2.1分鐘~4.0分鐘，20％A；

2.2）、質譜分析：

大氣壓化學電離被用作分析丙泊酚和丙泊酚-d₁₇的離子源；

設定參數如下：離子源溫度為150℃，毛細管電壓-4.5 kV，去溶劑化溫度500℃，去溶劑化氣體流量800 L / h，錐孔氣體流量50 L / h；三重四極桿質譜儀以選擇反應監測SRM模式運行； m / z 177→m / z 177用于丙泊酚監測； m / z 194→m / z194用于丙泊酚-d₁₇監測；兩個通道的相應錐孔電壓和碰撞能均設置為46 V和18V；

分別得到上清液的丙泊酚峰面積和丙泊酚-d₁₇峰面積。

3.根據權利要求2所述的血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法，其特征是所述步驟2）中：

使用C18反相超高效液相色譜柱的Waters ACQUITY H-class超高效液相色譜系統進行液相色譜分離，將負離子化模式下的沃特世Xevo TQD三重四極桿質譜儀與液相色譜系統聯合進行質譜分析。

4.根據權利要求1~3任一項所述的血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法，其特征是：

步驟1.3）中反復吸入并排出的操作次數為5~7次。

5.根據權利要求4所述的血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法，其特征是：步驟2.1）中，進樣溫度為8℃。

6.根據權利要求5所述的血漿中丙泊酚的快速固相萃取檢測方法，其特征是：

C18移液器吸頭為安捷倫OMIX C18移液器吸頭；

步驟1.1）中：先吸入100μL 50%乙腈的水溶液再排出廢液，然后重復上述吸入50%乙腈的水溶液再排出廢液的動作1~3次；從而實現充分濕潤并激活吸頭內的C18硅膠填料；

接著，先吸入100μL 1%甲酸水溶液再排出廢液，然后重復上述吸入1%甲酸水溶液、排出廢液的動作1~3次，從而實現平衡移液吸頭內的C18硅膠填料。