[發明專利]一種針對新型冠狀病毒的DC疫苗、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202010752429.1
• 申請日: 2020-07-30
• 公開（公告）號: CN111729079A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 劉明錄;馮建海;王亮;王立新;強邦明;韓慶梅;金海鋒;張傳鵬;許淼
• 申請（專利權）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61K35/17;C12N15/864;C12N15/62;A61P31/14;A61P11/00
• 代理公司: 山東華君知識產權代理有限公司 37300
• 代理人: 武歡歡

本發明提供一種針對新型冠狀病毒的DC疫苗，所述DC疫苗，包括COVID?19的S蛋白、趨化因子CCL19。本發明用自體外周血制作DC疫苗安全性高，沒有排斥反應。相比其他疫苗來說持續時間長，能更快的識別抗原，啟動T細胞的殺傷功能，同時產生抗體，體外試驗中，DC疫苗聯合CIK在4h時就已經啟動對靶細胞的殺傷；本發明制備的2019nCOV?S?CCL19 DC疫苗與CIK細胞聯合殺傷實驗效果好，體外試驗中，兩者聯合使用，與靶細胞混合24h進行檢測，在效靶比10:1時，對靶細胞的細胞毒性高達93.2％，在效靶比5:1時，對靶細胞的細胞毒性高達68.6%。

技術領域

本發明涉及一種針對新型冠狀病毒的DC疫苗、制備方法及其應用，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

樹突狀細胞（Dendritic cells，DC）是最有效的專業抗原提呈細胞（APC），在調節先天性和適應性免疫反應中發揮著重要作用。在其未成熟狀態下，DC在組織微環境中巡邏，并在外來病原體的存在下被激活。這種激活是在外源性危險信號通過Toll樣受體（TLR）等模式識別受體（PRR）刺激后發生的，并導致DC向引流淋巴結的遷移和處理過的表位向T細胞的呈現。在T細胞活化過程中，DC與T細胞受體（TCR）結合，分泌特異性細胞因子，并根據細胞因子環境刺激對TH1、TH2或Tregs的免疫反應。

最新研究表明，在COVID-19與SARS病毒S蛋白的保守性最高，其在結合細胞受體和介導病毒與宿主細胞膜的融合過程中起著重要作用，在COVID-19感染過程中是中和病毒感染的主要靶標。因此，選取COVID-19病毒的S蛋白作為抗原，刺激培養的DC細胞，制備成DC疫苗，可以快速識別病毒，并呈遞給T細胞，啟動T細胞的殺傷作用。

國內已采取多種技術手段快速開發新型冠狀病毒疫苗(COVID-19)。為加快疫苗開發速度并提高成功率，國家同時開發多種候選疫苗，包括滅活疫苗、減毒疫苗、核酸疫苗、DC疫苗。目前國內外用于新冠病毒的疫苗還沒有上市，但國內開發速度最快的核酸疫苗已經入Ⅱ期臨床，其次兩款滅活疫苗已獲得臨床審批。

滅活疫苗、減毒疫苗、核酸疫苗其作用機制均作為抗原刺激體內的組織細胞，通過一系列的反應刺激機體產生細胞免疫和體液免疫，在體內形成抗體。這三種疫苗主要通過肌肉注射進入體內，肌注后被肌肉細胞提取的抗原僅有很少一部分，所以對其在體內是否有抗體的形成，是無法預測的。

DC疫苗主要是負載相關的抗原，由于DC細胞不增殖，現有的DC疫苗發揮的作用處于一般水平。由于新冠病毒是新發現的病毒，目前還沒有相應的DC疫苗。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種針對新型冠狀病毒的DC疫苗、制備方法及其應用，采集自體外周血分離出單核細胞培養成DC細胞，利用COVID-19的S蛋白作為抗原刺激DC細胞，并整合到DC細胞中，回輸到體內，起到預防與治療的作用；實現以下發明目的：

本發明的DC疫苗縮短T細胞識別抗原的時間，更加快速啟動體內的免疫應答反應；和CIK細胞聯用，提高CIK細胞對COVID-19病毒的殺傷效果。

為解決上述技術問題，本發明采取以下技術方案：

一種針對新型冠狀病毒的DC疫苗，所述DC疫苗，包括COVID-19的S蛋白、趨化因子CCL19。

以下是對上述技術方案的進一步改進：

所述COVID-19的S蛋白的核苷酸序列為SEQ ID NO.2所示；所述CCL19的核苷酸序列為SEQ ID NO.4所示。

所述DC疫苗，包括融合基因片段CD8-2019nCOV-S-T2A-CCL19。

所述CD8-2019nCOV-S-T2A-CCL19的核苷酸序列為SEQ ID NO.6所示。