[發明專利]定向誘導hiPSC分化為神經細胞體系的HS5條件培養基

有效

• 申請號: 202010752115.1
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN111793608B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 楊濤;隋昳
• 申請（專利權）人: 楊濤
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/01;C12N13/00;C12N5/077
• 代理公司: 北京鵬帆慧博知識產權代理有限公司 11903
• 代理人: 袁冰

1.一種定向誘導hiPSC分化為神經細胞體系的組合培養基，其特征在于，所述組合培養基為基礎培養基、HS5條件培養基和誘導培養基；

所述HS5條件培養基為含有骨髓基質細胞HS5的分泌液的誘導培養基；所述HS5為經過照射的HS5；所述照射的條件為：γ射線輻照強度75-85Gy，照射時間為28-35分鐘；

所述誘導培養基為包括下述組分：20％KSR、1％NEAA、1mM的谷氨酰胺、0.1mMβ-巰基乙醇、10ng/ml bFGF、10ng/ml EGF、10ng/ml BDNF、10ng/ml NT-3、2％B27、0.5mM雙丁酰環磷酸腺苷、1ng/ml轉化生長因子β3和500ng/ml頭蛋白的DMEM/F12培養基，所述百分比為體積百分比；

所述的基礎培養基為添加有20ng/mlbFGF、20ng/ml EGF、2％B27添加劑、1％N2添加劑、1％胎牛血清、10μM佛司可林和0.2mM抗壞血酸的neurobasal培養基，所述百分比為體積百分比；

所述神經細胞體系中含有神經系統細胞包括神經干細胞、功能性神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞；

所述功能性神經元包括多巴胺能神經元、乙酰膽堿能神經元、γ-氨基丁酸能神經元、5-羥色胺能神經元和幼稚神經元；

所述HS5條件培養基通過下述制備方法制得：1)將5×10⁶～2×10⁷個經照射后的HS5細胞接種到8～15ml誘導培養基中；2)連續1～8天收集培養細胞的上清；3)將所述上清與所述誘導培養基以1:1～8:1比例混合即得。

2.如權利要求1所述的HS5條件培養基，其特征在于，所述輻照強度為80Gy，所述照射時間為30分鐘。

3.如權利要求1所述的HS5條件培養基，其特征在于，所述HS5條件培養基通過下述制備方法制得：1)將1×10⁷個經照射后的HS5細胞接種到10ml所述誘導培養基中；2)連續4天收集培養細胞的上清；3)將所述上清與所述誘導培養基以1:1比例混合即得。