[發明專利]一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010750289.4
• 申請日: 2020-07-30
• 公開（公告）號: CN111796105A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 鄭海學;田宏;羅俊聰;石正旺;王麗娟;萬穎;宋銳;楊波;張克山;李丹;茹毅;楊帆;朱紫祥;曹偉軍;黨文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

1.一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，由偶聯有ASFVP30重組蛋白的磁微粒混懸液、試劑R、定標品、質控品、樣品稀釋液、洗滌液及發光液組成，所述試劑R由抗體稀釋液、堿性磷酸酶標記的羊抗豬IgG抗體組成。

2.根據權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的ASFV P30重組蛋白磁微粒混懸液的制備包括以下步驟：將磁珠用EDC、NHS活化，按照10μg重組蛋白/mg磁珠的比例將兩者混合，于37℃包被3h；磁吸附去除上清，以10%乙醇胺鹽酸鹽水溶液封閉3h，用清洗液清洗磁珠3次，用含有2%BSA的保存液稀釋至0.5mg磁珠/mL。

3.根據權利要求2所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，含有2%BSA的保存液由2%BSA，1%海藻糖，0.1%EDTA，0.9%NaCl，0.05%Tris-HCl，0.5%酪蛋白，0.05M PMSF組成。

4.根據權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的化學發光標記物是堿性磷酸酶。

5.根據權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑R的制備包括以下步驟，將抗體稀釋液、堿性磷酸酶標記的羊抗豬IgG抗體灌入盒中，塑封，放入磁珠杯，二次封口。

6.根據權利要求5所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述抗體稀釋液由1%BSA、0.9%NaCl、0.5%Tween-20、pH7.0的0.05M MOPS、1mM ZnCl₂、1mM MgCl₂組成。

7.根據權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的定標品由定標品C1和定標品C2組成；定標品C1為ASFV抗體陰性血清，定標品C2是用保存液將ASFV抗體強陽性滅活血清稀釋至工作濃度后制得。

8.根據權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的質控品是用ASFV抗體陰性血清將ASFV抗體強陽性滅活血清稀釋后制得。

9.根據權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的樣品稀釋液由1%BSA，0.9%NaCl，0.5%Tween-20，pH7.0的0.05M MOPS組成。

10.權利要求1所述的一種非洲豬瘟病毒磁微粒化學發光抗體檢測試劑盒應用，其特征在于，包括以下步驟：在反應杯中加入待測樣品，再加入ASFV P30重組蛋白磁微粒混懸液，混勻，37℃反應10min，加入洗滌液洗掉上清，加入適量堿性磷酸酶標記的羊抗豬IgG抗體工作液，37℃反應10min，加入洗滌液洗掉上清，加入發光液，測定相應的發光值。