[發明專利]一種細胞低氧實驗裝置及分析方法

在審

• 申請號: 202010749404.6
• 申請日: 2020-07-30
• 公開（公告）號: CN111876328A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 劉萍;李博偉;陳令新;付龍文;滿銘叁
• 申請（專利權）人: 中國科學院煙臺海岸帶研究所
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/04;C12M1/00;B01L3/00;C12Q1/02;G01N33/561;G01N33/68;C12Q1/6851;G01N21/64
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 潘劍敏

1.一種細胞低氧實驗裝置，其特征在于，包括：下層板(2)，所述下層板(2)內嵌圣誕樹網絡結構的氣體管道，所述氣體管道由蜿蜒通道(4)和水平通道(5)組成，利用通道內層流和混流效應產生濃度梯度；所述下層板(2)設置有細胞培養室(6)。

2.如權利要求1所述的細胞低氧實驗裝置，其特征在于，所述圣誕樹網絡結構的氣體管道的上端面設置有氣體入口(3)，其下端面與所述細胞培養室(6)連接。

3.如權利要求1所述的細胞低氧實驗裝置，其特征在于，所述細胞培養室(6)設有帶螺絲孔的上層蓋板(1)，且通過螺絲孔與所述細胞培養室(6)連接。

4.如權利要求3所述的細胞低氧實驗裝置，其特征在于，所述上層蓋板(1)設有軟硅膠墊，所述上層蓋板(1)通過軟硅膠墊與所述細胞培養室(6)連接。

5.如權利要求1所述的細胞低氧實驗裝置，其特征在于，所述細胞培養室(6)設置有氣體出口(7)。

6.如權利要求2所述的細胞低氧實驗裝置，其特征在于，所述圣誕樹網絡結構的氣體管道的上端面設置有2個氣體入口(3)，其下端面設置有5個濃度梯度氣體流出口。

7.如權利要求6所述的細胞低氧實驗裝置，其特征在于，所述5個濃度梯度流出口通往所述細胞培養室(6)內。

8.一種利用如權利要求1所述的細胞低氧實驗裝置的分析方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

步驟1，將帶有細胞的紙芯片放入所述細胞培養室(6)中，進行低氧濃度梯度處理；

步驟2，熒光成像法檢測紙芯片上細胞內的相關信號變化；

步驟3，將帶有細胞的紙芯片放入離心管中消化收集細胞，進行流式細胞儀分析；

步驟4，將帶有細胞的紙芯片放入離心管進行細胞裂解，收集蛋白進行western blot分析或提取細胞RNA進行逆轉錄PCR或實時熒光定量PCR。

9.如權利要求1所述的細胞低氧實驗裝置的分析方法，其特征在于，步驟1中，具體步驟為：將紙芯片的兩面紫外照射過夜滅菌，將紙芯片上加入稀釋40倍的Matrigel，4℃過夜，然后在37℃放置1小時讓Matrigel凝固，將紙芯片放在24孔板中，加入細胞懸液，待細胞貼壁牢固后，將帶有細胞的紙芯片放入提前加入培養基的細胞培養室(6)中，將上層蓋板(1)及軟硅膠墊嵌入所述下層板(2)內，兩個氣體入口(3)以同樣的壓力分別輸入空氣和氮氣，將細胞低氧實驗裝置放入細胞培養箱，細胞在低氧梯度裝置中處理。