[發(fā)明專利]免疫球蛋白結(jié)合蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010747812.8
• 申請(qǐng)日: 2020-07-30
• 公開（公告）號(hào): CN111732642B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江必旺;程雷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州納微科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/31
• 分類號(hào): C07K14/31;C07K16/00;C07K1/22;C12N15/31;C12P21/02;B01D15/38
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 戴志攀

本發(fā)明涉及免疫球蛋白分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種免疫球蛋白結(jié)合蛋白及其應(yīng)用。所述免疫球蛋白結(jié)合蛋白由葡萄球菌蛋白A的E、C和Z?domain拼接得到，并意外獲得了抗體載量的提升和耐堿特性，進(jìn)而可用于免疫球蛋白的親和層析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫球蛋白分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種免疫球蛋白結(jié)合蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著生物技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展，對(duì)疾病的預(yù)防和治療發(fā)生了革命性的變革。如今的生物技術(shù)幾乎滲透到我們生活的每一個(gè)角落，而在這其中針對(duì)于抗體的研究也成績(jī)凸顯。從多克隆抗體、單克隆抗體再到重組抗體，每一次技術(shù)的飛越都會(huì)給人們無(wú)限的驚喜。但是，像所有其他蛋白質(zhì)藥物一樣，抗體的生產(chǎn)技術(shù)、生產(chǎn)規(guī)模以及純化技術(shù)是制約抗體生產(chǎn)的重要技術(shù)環(huán)節(jié)。而抗體純化技術(shù)又成為了關(guān)鍵，純化技術(shù)的好與壞，規(guī)模的大與小，往往決定了一個(gè)抗體藥物生產(chǎn)的生命力。

將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附而滯留在層析柱中。那些沒(méi)有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質(zhì)分開，然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘海淖兘Y(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。在生物分子中有些分子的特定結(jié)構(gòu)部位能夠同其他分子相互識(shí)別并結(jié)合，如酶與底物的識(shí)別結(jié)合、受體與配體的識(shí)別結(jié)合、抗體與抗原的識(shí)別結(jié)合，這種結(jié)合既是特異的，又是可逆的，改變條件可以使這種結(jié)合解除。生物分子間的這種結(jié)合能力稱為親和力。親和層析就是根據(jù)這樣的原理設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)分離純化方法，利用共價(jià)連接有特異配體的層析介質(zhì)分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白或其它分子的層析技術(shù)。

親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應(yīng)的抗體（或抗原）發(fā)生特異性結(jié)合，而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應(yīng)抗體（或抗原）選擇性地結(jié)合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開，達(dá)到分離提純的目的。此法具有高效、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

葡萄球菌蛋白 A（staphylococcus protein A，SPA）含有5個(gè)可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，它是金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）細(xì)胞壁中的一種組成蛋白，金黃色葡萄球菌是革蘭氏陽(yáng)性菌，是醫(yī)院中交叉感染中常見的一種化膿感染菌，菌體直徑約為 0.8μm，呈小球型，因聚堆呈葡萄串型而得名。SPA能夠結(jié)合很多哺乳動(dòng)物IgG抗體（常常是Fc段），因而是最早應(yīng)用于親和層析并進(jìn)行抗體純化的蛋白之一。

但是，由于SPA其本身也是一種蛋白，因而在親和吸附及洗脫時(shí)的理化性質(zhì)要求較高，特別對(duì)堿性試劑的耐性較差，并且其結(jié)合抗體的載量也常常不甚理想。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種免疫球蛋白結(jié)合蛋白，其具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還涉及一種蛋白多聚體，其含有兩個(gè)或多個(gè)SEQID NO:1所示的重復(fù)單元。

本發(fā)明還涉及所述免疫球蛋白結(jié)合蛋白及蛋白多聚體相關(guān)的核酸、載體、宿主細(xì)胞及生產(chǎn)方法。

根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還涉及一種親和層析介質(zhì)以及含有所述親和層析介質(zhì)的親和層析分離裝置，所述層析介質(zhì)包括固相載體和接枝于所述固相載體上的配基；

所述配基為如上所述的免疫球蛋白結(jié)合蛋白或如上所述的蛋白多聚體。

本發(fā)明還涉及上述產(chǎn)品從液體介質(zhì)分離或富集免疫球蛋白的用途。

所述免疫球蛋白結(jié)合蛋白由葡萄球菌蛋白 A的E、C和Z-domain拼接得到，并意外獲得了抗體載量的提升和耐堿特性，進(jìn)而可用于免疫球蛋白的親和層析。

附圖說(shuō)明