[發明專利]一種酶切探針恒溫檢測SARS-CoV-2新型冠狀病毒核酸的試劑盒

有效

• 申請號: 202010747552.4
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111793720B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 馮華華;胡小許;常沙沙;張祺;劉利成
• 申請（專利權）人: 江蘇宏微特斯醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京玄法律師事務所 16002
• 代理人: 潘滿根

本發明提供一種酶切探針恒溫檢測SARS?CoV?2新型冠狀病毒核酸的試劑盒，所述試劑盒包括：檢測SARS?CoV?2新型冠狀病毒ORF1ab基因等溫擴增引物和相應可被RNaseH酶切的含RNA堿基探針；其中該堿基探針的RNA堿基左、右兩端分別標記報告熒光基團和淬滅基團。利用高效的恒溫擴增的引物與探針，可以對SARS?CoV?2新型冠狀病毒進行恒溫的多重檢測，具有高靈敏度與高特異性。本發明的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，具有較高的靈敏度和特異性，實現對新型冠狀病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要進行新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者的咽拭子、肺泡灌洗液和痰液樣本的檢測，具有簡便、快速、準確的特點。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別涉及一種酶切探針恒溫檢測SARS-CoV-2新型冠狀病毒核酸的試劑盒。

背景技術

冠狀病毒為不分階段的單股正鏈RNA病毒，屬于巢病毒目冠狀病毒科正冠狀病毒亞科，根據其血清型和基因組特點，分為α、β、γ、δ四個屬。已知感染人的冠狀病毒有7種，包括HCoV-OC43、HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、MERSr-CoV、SARSr-CoV和新發現的SARS-CoV-2；SARS-CoV-2是一種β屬的新型冠狀病毒。

SARS-CoV-2對紫外線和熱敏感，56℃30min、乙醚、75％乙醇、含氯消毒劑、過氧乙酸等均可有效滅活冠狀病毒。基于目前的流行病學調查和研究成果，潛伏期為1-14天，多為3-7天；感染途徑主要為SARS-CoV-2感染患者，目前SARS-CoV-2表現出來的主要癥狀為發熱、咳嗽、乏力、肌肉疼痛或者不適；重癥表現為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒、出凝血功能障礙，感染途徑還包括無癥狀感染者，無癥狀感染者的存在可導致疑似感染者及密切接觸者數量大量增加，加速疫情的蔓延。

新型冠狀病毒肺炎的診斷基于流行病學史、臨床表現及影像學表現，而病毒的核酸檢測可為其診斷提供直接證據，促進患者的隔離、治療和評估，同時還能為疫情防控中心及時切斷傳播途徑、有效控制傳染源提供指導，保障疫情的防控。目前我國《新型冠狀病毒肺炎診療方案》中推薦用實時熒光RT-PCR技術，該技術具有高度靈敏、高特異性，是目前核酸檢測廣泛運用的方法。但由于PCR方法對實驗室，設備等要求較高，不能滿足一些室外環境或較落后地區的檢測，因此需要開發一種簡便、快速的SARS-CoV-2 檢測試劑盒。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種酶切探針恒溫檢測SARS-CoV-2新型冠狀病毒核酸的試劑盒，所述試劑盒包括：檢測SARS-CoV-2新型冠狀病毒ORF1ab基因等溫擴增引物和相應可被RNaseH酶切的含RNA堿基探針；其中該堿基探針的RNA堿基左、右兩端分別標記報告熒光基團和淬滅基團。

在一種實施方式中，所述檢測SARS-CoV-2新型冠狀病毒ORF1ab基因等溫擴增引物是SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.6和相應可被RNaseH酶切的探針是SEQ ID NO.7，該探針中包括一個RNA堿基，斜體小寫字母表示的堿基為RNA堿基，T修飾報告熒光基團，淬滅基團修飾在3'末端；

在一種實施方式中，試劑盒還包括檢測一段人工合成且與SARS-CoV-2新型冠狀病毒及人源核酸均非同源的內參基因等溫擴增引物SEQ ID NO.8-SEQ ID NO.13和相應可被RNaseH酶切探針SEQ ID NO.14，該探針中包括一個RNA堿基，斜體下劃線小寫所顯示的堿基為RNA堿基，T修飾報告熒光基團，淬滅基團修飾在3'末端；

在一種實施中，所述內參基因為植物中一段隨機組合序列。