[發明專利]一種基于單分散聚合物檢測免疫球蛋白IgG的方法及其應用

有效

• 申請號: 202010747115.2
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111879872B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 張勇;侯玉
• 申請（專利權）人: 納譜分析技術（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種基于單分散聚合物檢測免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

（1）將待測樣品轉移至固相萃取柱中，經過親和色譜固相萃取后淋洗，而后洗脫得到洗脫液；

所述固相萃取柱的填料包括：單分散聚合物微球和以共價鍵連接在所述單分散聚合物微球上的蛋白G；

（2）使用高效液相體積排阻色譜法對步驟（1）所得洗脫液進行分析，得到所述待測樣品中的免疫球蛋白IgG的含量；

步驟（1）中所述單分散聚合物微球的粒徑為65-90 μm，孔徑為10~150 nm；

步驟（1）中所述單分散聚合物微球的材料為聚丙烯酸酯；

步驟（1）中所述淋洗使用的淋洗液為pH為5.0~7.9的PBS緩沖溶液；

步驟（1）中所述洗脫使用的溶液為pH為1.0~4.0的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液；

步驟（2）中所述高效液相體積排阻色譜法中使用的流動相包括PBS緩沖液和氯化鈉緩沖溶液；

步驟（2）中所述高效液相體積排阻色譜法采用等度洗脫。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述單分散聚合物微球的制備方法包括乳液聚合、懸浮聚合、分散聚合或種子溶脹聚合中的任意一種或至少兩種的組合。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述待測樣品在轉移前經過預處理，所述預處理包括溶解、稀釋和過濾。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述過濾為使用0.45 μm微孔濾膜進行過濾。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述固相萃取柱在使用前還包括活化的操作，所述活化的方法為：依次使用雙蒸水和PBS緩沖液沖洗所述固相萃取柱進行活化。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述雙蒸水與固相萃取柱中填料的體積比為(4.5~5.5):1。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述雙蒸水與固相萃取柱中填料的體積比為5:1。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述PBS緩沖液與固相萃取柱中填料的體積比為(8~12):1。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述PBS緩沖液與固相萃取柱中填料的體積比為10:1。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述待測樣品與固相萃取柱中填料的體積比為(0.5~1.5):1。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述待測樣品與固相萃取柱中填料的體積比為1:1。

12.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述淋洗液的pH為6.5。

13.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述淋洗液與固相萃取柱中填料的體積比為(3.0~6.0):1。

14.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，所述淋洗液與固相萃取柱中填料的體積比為5:1。

15.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酸鈉-乙酸緩沖溶液的pH為3。

16.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酸鈉-乙酸緩沖溶液與固相萃取柱中填料的體積比為(1.5~4.5):1。

17.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酸鈉-乙酸緩沖溶液與固相萃取柱中填料的體積比為3:1。