[發(fā)明專利]含有MC1R基因的重組腺相關(guān)病毒的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010747102.5
• 申請(qǐng)日: 2020-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN111793649A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 龔志婷;王曉兵;陳漫;劉秋碟;段延勤;段睿;李云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大理大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/864
• 分類號(hào): C12N15/864;C12N15/12;A61K48/00;A61K38/17;A61P25/16;A61P25/28
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.含有MC1R基因的重組腺相關(guān)病毒在制備改善記憶的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述MC1R基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，所述重組腺相關(guān)病毒的構(gòu)建及包裝，包括如下步驟：

S1、提取小鼠總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA；

S2、設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，以S1的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得目的基因MC1R；

S3、將目的基因插入AAV載體pAAV-CaMKIIα-eGFP的EcoR I和Hind III酶切位點(diǎn)之間，得連接產(chǎn)物；

S4、將所述連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至H5α感受態(tài)，培養(yǎng)，經(jīng)陽性克隆鑒定，測(cè)序正確的為插入目的基因的rAAV重組腺相關(guān)病毒載體pAAV-CaMKIIα-eGFP-MC1R；

S5、將質(zhì)粒pAAV-DJ/8，pHelper及pAAV-CaMKIIα-eGFP-MC1R共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后更換為完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后收集富含AAV病毒顆粒的HEK-293細(xì)胞，純化病毒，純化產(chǎn)物即為能夠特異性在興奮性神經(jīng)元中特異性表達(dá)MC1R基因的重組腺相關(guān)病毒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，擴(kuò)增引物具體為：上游引物如SEQ ID NO.2所示，下游引物如SEQ ID NO.3所示。