[發明專利]一種免疫調節活性六肽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010746232.7
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111978374B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 楊寶;蔣躍明
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/06;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/34;C07K1/36;C07K1/14;A61K38/08;A61P37/02;A23L33/18
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了一種免疫調節活性六肽及其制備方法和應用。將大豆蛋白加水分散，加蛋白酶水解后，高溫使酶失活，離心獲得蛋白水解物的上清液，膜分離后干燥，采用反相色譜柱純化活性肽，用水、乙醇溶液梯度洗脫，收集特定濃度乙醇溶液洗脫組分，濃縮后再采用Sephadex LH?20色譜柱純化，收集特定濃度乙醇溶液洗脫組分，濃縮后干燥得到目標免疫調節活性六肽。本發明利用大豆蛋白制備免疫調節活性六肽，其產率為21～76g/kg(純度為75～95％)。本發明為免疫調節活性六肽的制備提供了一種新的方法，對于推動大豆蛋白的深加工利用，提升產品附加值，促進該行業的可持續發展具有重要的意義。

技術領域：

本發明屬于農產品加工領域，具體涉及一種免疫調節活性六肽及其制備方法和應用。

背景技術：

活性肽屬于重要的食品功能因子，具有調節免疫、抗氧化、預防骨質疏松等生物活性，廣泛應用于保健食品等產品生產，深受消費者的歡迎。大豆蛋白為大宗蛋白原料，價格低廉，易于獲取，非常適合加工活性肽等高價值產品。活性肽的生物活性與其化學結構，特別是氨基酸序列高度相關。目前雖然有不少關于大豆活性肽的報道，但活性較高的活性肽產品仍然很少。因此，有必要開展大豆活性肽的制備工藝、結構鑒定與活性評價研究，揭示主要活性肽的化學結構，這對于大豆蛋白的高值化利用具有重要意義。

發明內容：

本發明的第一個目的是提供一種從大豆蛋白中分離得到的免疫調節活性六肽。

本發明發現并制備了一種免疫調節活性六肽，經液質聯用色譜解析確定結構為如式(I)所示：

Gln-Pro-Lys-Gln-Glu-Glu

式(I)。

本發明的第二個目的是提供一種制備免疫調節活性六肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將大豆蛋白加水分散，加蛋白酶水解后，高溫使酶失活，離心獲得蛋白水解物的上清液，膜分離后干燥，獲得大豆蛋白水解物，大豆蛋白水解物采用反相色譜柱純化活性肽，用水、乙醇水溶液梯度洗脫，收集特定濃度乙醇溶液洗脫組分，濃縮后再采用Sephadex LH-20色譜柱純化，收集特定濃度乙醇溶液洗脫組分，濃縮后干燥得到目標免疫調節活性六肽。

優選，所述的“大豆蛋白水解物采用反相色譜柱純化活性肽，用水、乙醇水溶液梯度洗脫，收集特定濃度乙醇溶液洗脫組分，濃縮后再采用Sephadex LH-20色譜柱純化，收集特定濃度乙醇溶液洗脫組分，濃縮后干燥得到目標免疫調節活性六肽”是將大豆蛋白水解物采用C18反相色譜柱純化，用水-乙醇作為洗脫劑，按乙醇體積分數從0％按照2％的幅度逐漸上升到20％梯度洗脫，收集體積分數6％乙醇濃度洗脫的目標活性肽成分，濃縮后用Sephadex LH-20色譜柱純化，用體積分數6％乙醇水溶液洗脫，收集體積分數6％乙醇濃度洗脫的目標活性肽組分，濃縮后干燥得到目標免疫調節活性六肽。

優選，所述的將大豆蛋白加水分散，是將大豆蛋白加入5～20倍質量的水中，然后攪拌分散。

優選，所述的“加蛋白酶水解后，高溫使酶失活，離心獲得蛋白水解物的上清液，膜分離后干燥獲得大豆蛋白水解物”是按照大豆蛋白的質量加入0.1％～1.0％的堿性蛋白酶，pH 7.5～9.5，溫度30～65℃，酶解1～5小時，然后加入0.1％～1.0％的中性蛋白酶，pH6.0～8.0，溫度40～60℃，酶解1～5小時，升溫至90℃保持20分鐘使酶失活，離心獲得蛋白水解物的上清液，采用截留分子量3000道爾頓的超濾膜過濾，收集透過液噴霧干燥，得到大豆蛋白水解物。

本發明的第三個目的是提供上述免疫調節活性六肽在制備免疫調節活性藥物、食品或保健品中的應用。

本發明的第四個目的是提供一種免疫調節活性藥物、食品或保健品，其含有上述免疫調節活性六肽作為活性成分。

本發明的第五個目的是提供了大豆蛋白在制備上述免疫調節活性六肽中的應用。