[發明專利]一種人類外周血免疫細胞凍存高效穩定劑及應用和凍存方法

在審

• 申請號: 202010745488.6
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111685108A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 孔偉圣;崔國禎;藍欣;孫智勇
• 申請（專利權）人: 珠海貝索細胞科學技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 廣東朗乾律師事務所 44291
• 代理人: 楊煥軍

1.一種人類外周血免疫細胞凍存高效穩定劑，其特征在于，所述凍存高效穩定劑主要成分為脯氨酸、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇、依克多因、聚乙烯醇及不含酚紅的基礎細胞培養液。

2.根據權利要求1所述的凍存高效穩定劑，其特征在于所述脯氨酸濃度為1-2％，W/V；所述蔗糖的濃度為5-6％，W/V；所述聚乙烯吡咯烷酮的濃度為3-6％，W/V；所述乙二醇的V/V比例為5-8％，所述依克多因的濃度為2-5％，W/V；所述聚乙烯醇的濃度為1-3％，W/V；所述基礎細胞培養液比例為92-95％，V/V。

3.根據權利要求1或2所述的凍存高效穩定劑，其特征在于，所述人類外周血免疫細胞為人類外周血單個核細胞以及體外細胞因子誘導的免疫細胞。

4.根據權利要求3所述的凍存高效穩定劑，其特征在于，所述體外細胞因子誘導的免疫細胞為CIK細胞、LAK細胞、自然殺傷細胞、NKT細胞、CTL及γδT細胞等。

5.根據權利要求1所述的凍存高效穩定劑，其特征在于，所述基礎細胞培養液為不含酚紅的Alys-Basal基礎細胞培養液。

6.權利要求1-5任意一項所述凍存高效穩定劑在凍存人類外周血單個核細胞以及體外細胞因子誘導的免疫細胞中的應用。

7.根據權利要求6所述應用，其特征在于，所述體外細胞因子誘導的免疫細胞為殺傷細胞、LAK細胞、自然殺傷細胞、NKT細胞、CTL及γδT細胞。

8.一種利用權利要求1-5任意一項所述凍存高效穩定劑進行細胞凍存方法，包括以下步驟：

(1)獲取需要凍存的細胞并懸浮于所述凍存高效穩定劑中形成細胞懸液，分裝于凍存管；

(2)凍存管放置程序降溫盒中，先放置-80℃過夜冷凍，然后轉入液氮中長期凍存。

9.根據權利要求8所述細胞凍存方法，其特征在于，所述細胞懸液細胞密度是1-2×10⁷個/ml。

10.根據權利要求8所述細胞凍存方法，先放置-80℃過夜冷凍的時間為18-26小時，再轉移至液氮長期保存。