[發明專利]一類含谷氨酰胺或天冬酰胺的環二肽的合成方法

有效

• 申請號: 202010745440.5
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111875668B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 李晨;王惠嘉;王萬科;張忠旗;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K5/12
• 分類號: C07K5/12;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/02
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一類含谷氨酰胺或天冬酰胺的環二肽的合成方法，所述環二肽的結構式為：

其中，式Ⅰ為含谷氨酰胺環二肽，式Ⅱ為含天冬酰胺環二肽，R為除天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸外其他α-氨基酸的有機側鏈；

其特征在于所述合成方法由下述步驟組成：

(1)以2-Chlorotrityl Chloride Resin為載體，Fmoc-AA(X)-OH和Fmoc-Glu(OtBu)-OH或Fmoc-Asp(OtBu)-OH為原料，采用固相法合成含谷氨酸或含天冬氨酸的二肽樹脂，裂解樹脂同時脫側鏈保護基，得到H-Glu-AA-OH的三氟乙酸鹽或H-Asp-AA-OH的三氟乙酸鹽；其中，AA為除天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸外其他α-氨基酸，X為AA的常見的側鏈保護基團；

(2)以甲醇為溶劑，將H-Glu-AA-OH的三氟乙酸鹽或H-Asp-AA-OH的三氟乙酸鹽與二氯亞砜反應，反應完后減壓濃縮，用乙酸乙酯/水體系萃取，收集水相，得到H-Glu(OMe)-AA-OMe鹽酸鹽或H-Asp(OMe)-AA-OMe鹽酸鹽的水溶液；

(3)將H-Glu(OMe)-AA-OMe鹽酸鹽或H-Asp(OMe)-AA-OMe鹽酸鹽的水溶液通過無機堿催化水相環合，合成側鏈羧基甲酯保護的環二肽Cyclo[Glu(OMe)-AA]或Cyclo[Asp(OMe)-AA]；

(4)將Cyclo[Glu(OMe)-AA]或Cyclo[Asp(OMe)-AA]在氨的甲醇溶液或氨的1,4-二氧六環溶液中氨解，相應的得到Cyclo(Gln-AA)或Cyclo(Asn-AA)，即式Ⅰ所示的含谷氨酰胺環二肽或式Ⅱ所示的含天冬酰胺環二肽。

2.根據權利要求1所述的含天冬酰胺或谷氨酰胺的環二肽的合成方法，其特征在于：步驟(2)中，所述H-Glu-AA-OH的三氟乙酸鹽或H-Asp-AA-OH的三氟乙酸鹽與二氯亞砜的摩爾比為1:2.0～3.0，反應溫度為-10～0℃，反應時間為6～8小時。

3.根據權利要求1所述的含天冬酰胺或谷氨酰胺環二肽的合成方法，其特征在于：步驟(3)中，向H-Glu(OMe)-AA-OMe鹽酸鹽或H-Asp(OMe)-AA-OMe鹽酸鹽的水溶液中加入無機堿，調節pH＝7～8，進行水相環合；其中所述無機堿為碳酸氫鈉。

4.根據權利要求1所述的含天冬酰胺或谷氨酰胺的環二肽的合成方法，其特征在于：步驟(4)中，所述Cyclo[Glu(OMe)-AA]或Cyclo[Asp(OMe)-AA]與氨的甲醇溶液或氨的1,4-二氧六環溶液的比例為1mmol:6～10mL。

5.根據權利要求1或4所述的含天冬酰胺或谷氨酰胺的環二肽的合成方法，其特征在于：步驟(4)中，氨解反應4～6小時后，補加氨水繼續反應3～4小時，以促進氨解反應的進行。

6.根據權利要求5所述的含天冬酰胺或谷氨酰胺的環二肽的合成方法，其特征在于：步驟(4)中，所述Cyclo[Glu(OMe)-AA]或Cyclo[Asp(OMe)-AA]的質量與補加的氨水的體積比為1g:2.5～4mL。