[發(fā)明專利]編碼人卵黃狀黃斑病蛋白1的核酸分子及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010743905.3
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN111849998A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李斌;賀從武
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢紐福斯生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/864;C12N7/01;A61K48/00;A61K38/17;A61P27/02
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.編碼人卵黃狀黃斑病蛋白1的核酸，包括I)～I(xiàn)V)中至少一種：

I)、具有如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的核酸；

II)、在I)所述的片段中取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)核苷酸的核酸；

III)、與如I所示的核苷酸序列具有至少70％同源性的序列且編碼如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的蛋白的核酸；

IV)、與I)～I(xiàn)II)中任一項(xiàng)部分互補(bǔ)或完全互補(bǔ)的核酸。

2.人卵黃狀黃斑病蛋白1的轉(zhuǎn)錄單元，其包括：啟動(dòng)子、權(quán)利要求1所述的核酸和終止子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)錄單元，其特征在于，其5’端至3’端依次包括：

啟動(dòng)子、調(diào)控片段、權(quán)利要求1所述的核酸和終止子；

或啟動(dòng)子、權(quán)利要求1所述的核酸、調(diào)控片段和終止子；

或啟動(dòng)子、調(diào)控片段1、權(quán)利要求1所述的核酸、調(diào)控片段2和終止子。

4.重組載體，其包括骨架載體和權(quán)利要求1所述的核酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于，其為病毒載體；

所述病毒載體選自DNA病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體中至少一種；其中，腺相關(guān)病毒載體的血清型為AAV2、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8或AAV9。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的重組載體，其特征在于，其骨架載體為AAV-MCS。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組載體，其特征在于，其包括依次連接的：上游ITR、CMV增強(qiáng)子、CMV啟動(dòng)子、SEQ ID NO:1所示序列的核酸片段、hGHpoly(A)信號(hào)片段和下游ITR。

8.一種質(zhì)粒組合，其特征在于，包括權(quán)利要求4～7任一項(xiàng)所述的重組載體、輔助功能質(zhì)粒和附屬功能質(zhì)粒。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的質(zhì)粒組合，其特征在于，所述輔助功能質(zhì)粒為pAdHelper；所述附屬功能質(zhì)粒為pAAV2/5。

10.表達(dá)人卵黃狀黃斑病蛋白1的腺相關(guān)病毒的制備方法，其包括：將權(quán)利要求8或9所述的質(zhì)粒組合感染宿主細(xì)胞后，經(jīng)純化獲得表達(dá)人卵黃狀黃斑病蛋白1的腺相關(guān)病毒。

11.權(quán)利要求10所述制備方法制備獲得的表達(dá)人卵黃狀黃斑病蛋白1的腺相關(guān)病毒。

12.權(quán)利要求4～7任一項(xiàng)所述的重組載體、權(quán)利要求8或9所述的質(zhì)粒組合或權(quán)利要求11所述的腺相關(guān)病毒在制備恢復(fù)視力和/或治療眼部疾病的藥物中的應(yīng)用。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述眼部疾病為視網(wǎng)膜病變；優(yōu)選的，所述視網(wǎng)膜病變?yōu)檫z傳性視網(wǎng)膜病變；更優(yōu)選的，所述視網(wǎng)膜病變?yōu)槁腰S樣黃斑營養(yǎng)不良。

14.一種藥物，其特征在于，包括權(quán)利要求4～7任一項(xiàng)所述的重組載體、權(quán)利要求8或9所述的質(zhì)粒組合或權(quán)利要求11所述的腺相關(guān)病毒。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物，其特征在于，包括權(quán)利要求11所述的腺相關(guān)病毒和藥學(xué)上可接受的輔料，其中權(quán)利要求11所述的腺相關(guān)病毒的滴度為5×10¹⁰vg/mL～1×10¹²vg/mL。

16.一種藥物的遞送方法，其特征在于，將如權(quán)利要求10～12任一項(xiàng)所述的藥物制劑注射至眼部，優(yōu)選地為視網(wǎng)膜下注射。