[發明專利]一種以Clorf100為靶點的男性不育治療方法

在審

• 申請號: 202010741376.3
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN113512581A
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 劉武江;唐運革;張欣宗
• 申請（專利權）人: 廣東省計劃生育科學技術研究所（廣東省計劃生育專科醫院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 東莞市凱粵智華專利商標代理事務所(普通合伙) 44698
• 代理人: 羅麗

1.一種以Clorf100為靶點的男性不育治療方法，其特征在于：包括如下步驟：

（一）正常睪丸組織采集：

在尸體腎移植時采集2例青壯年有孩子的睪丸組織，作為正常睪丸組織的對照；

（二）無精子癥睪丸組織采集：

采集了手術顯微取精的無精子癥睪丸組織，作為異常組織的樣品；

（三）樣品分類：

根據病理結果將阻滯分為生精阻滯在精原細胞5例、阻滯在精母細胞階段5例、阻滯在精子細胞階段5例、唯支持細胞綜合癥5例，另選取5例梗阻性無精子癥做對照，加上正常睪丸組織；

（四）樣品對比：

應用基因芯片比較正常睪丸組織和非梗阻無精子癥的睪丸組織可以看出，芯片質量控制良好，基因差異顯著；

（五）試驗：

設計合成C1orf100的特異性引物，行RT-PCR驗證，發現C1orf100在正常睪丸組織及梗阻性無精子癥病人的睪丸組織強表達，而且生精阻滯階段越早，表達降低越顯著，在唯支持細胞綜合癥幾乎沒有表達，設計合成C1orf100的Real-timePCR引物，行實時定量PCR擴增，標準曲線制作滿意后，擴增模板，模板含量以CT值表示，CT值越高，表明擴增模板的含量越低，在唯支持細胞綜合癥無精子癥擴增40個循環也未能擴增出，C1orf100在正常睪丸組織及梗阻性無精子癥病人的睪丸組織強表達，而且生精阻滯階段越早，表達降低越顯著，蛋白雜交，從蛋白水平證實C1orf100在正常睪丸組織及梗阻性無精子癥病人的睪丸組織強表達，而且生精阻滯階段越早，表達降低越顯著。

2.根據權利要求1所述的一種以Clorf100為靶點的男性不育治療方法，其特征在于：所述步驟三中的樣品分為生精阻滯在精原細胞5例、阻滯在精母細胞階段5例、阻滯在精子細胞階段5例、唯支持細胞綜合癥5例，另選取5例梗阻性無精子癥做對照，加上正常睪丸組織，共27例。

3.根據權利要求1所述的一種以Clorf100為靶點的男性不育治療方法，其特征在于：所述步驟三中樣品中需要排除一些不能夠進行使用的樣品，明確的染色體異常的、AZF微缺失的和睪丸前因素的樣品都排除在外。

4.根據權利要求1所述的一種以Clorf100為靶點的男性不育治療方法，其特征在于：所述步驟四行基因芯片檢測，評價為優良，獲得差異表達基因。

5.根據權利要求1所述的一種以Clorf100為靶點的男性不育治療方法，其特征在于：所述步驟五中C1orf100是與精子生成相關的分子標記，可以應用于診斷標記或治療靶點，尤其對無精子癥生精阻滯的治療，最終治療無精子癥這類男性不育的診斷或治療。