[發明專利]枯草芽孢桿菌MK15及其發酵方法與用途

有效

• 申請號: 202010739358.1
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111763647B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 王淑軍;賴曉樺;陳德林;呂明生;房耀維;楊杰;鄧甜;劉雪芹;胡經飛
• 申請（專利權）人: 鹽城康林達生物科技有限公司;江蘇省海洋資源開發研究院（連云港）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C08B37/00;C12R1/125
• 代理公司: 連云港潤知專利代理事務所 32255
• 代理人: 劉喜蓮

1.一?種?枯?草?芽?孢?桿?菌?（Bacillussubtilis）?MK15?，?其?特?征?在?于?：?其保?藏?號?為?CGMCCNO.19743。

2.一種枯草芽孢桿菌?MK15?發酵米糠產?α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，其特征在于，枯草芽孢桿菌?MK15的?保?藏?號?為?CGMCCNO.19743，產?α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法包括以下步驟：

（1）枯草芽孢桿菌?MK15?種子液接入發酵培養基發酵培養：?發酵溫度為?35℃,發酵時間為48h-50h，pH?為?8.0，接種量為?3%，搖床轉速為?180rpm，發酵裝液量為?50mL/250mL；所述的發酵培養基是：米糠?5%、葡萄糖?0.1%、NaCl0.5%、尿素?0.5%、pH8.0、自來水配制，115℃滅菌?20min；

（2）取枯草芽孢桿菌?MK15?發酵液，?4℃,8000rpm?離心?30min，?取上清液過0.45μm濾膜；

（3）發酵產物的純化：用?HCl?和?NaOH?溶液調節?pH?去除米糠發酵產物中的酸性和堿性蛋白，用無水乙醇醇沉，再用?Sevage?法去除剩余的蛋白，真空冷凍干燥機凍干；

種子液的制備方法是：從斜面刮取兩環枯草芽孢桿菌?MK15?接入?50mL?種子培養基，37℃,180rpm，培養?24h；種子培養基的組成為：牛肉浸膏?3g/L、蛋白胨?10g/L、NaCl5g/L、pH7.0、自來水配制，?121℃滅菌?20min；

發酵產物的純化方法為：用氫氧化鈉將米糠發酵液的?pH?值調至?9.0?，8000rpm?離心30min，去除堿性蛋白；再用鹽酸將?pH?值調至?5.0?去除酸性蛋白，然后將?pH?值調到7.0；用三倍體積的無水乙醇，4℃醇沉?24h?，8000rpm?離心?30min?后取沉淀，用蒸餾水復溶；用?Sevage?法去除剩余蛋白，將樣品溶液、氯仿、正丁醇之比調為?25:5:1，混合物劇烈震蕩?30min，?8000rpm，4℃離心?5min，去除蛋白質與氯仿，正丁醇生成的凝膠物；發酵產物用真空冷凍干燥機凍干。

3.權利要求?1?所述的一種枯草芽孢桿菌?MK15?發酵產物的用途，其特征在于：所述的用途為將枯草芽孢桿菌?MK15?發酵產物用于?α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備，所述的發酵產物是采用權利要求?2?所述的方法制得。