[發明專利]雙重實時熒光定量PCR鑒定布魯氏菌S2疫苗株的方法及其使用的成套試劑

有效

• 申請號: 202010738876.1
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111876502B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 董浩;原霖;王傳彬;顧小雪;魏巍;韓燾;趙柏林;畢一鳴;徐琦
• 申請（專利權）人: 中國動物疫病預防控制中心（農業農村部屠宰技術中心）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

本發明公開了雙重實時熒光定量PCR鑒定布魯氏菌S2疫苗株的方法及其使用的成套試劑。成套試劑由引物Bru?F1、引物Bru?R1、探針Bru?Probe1、引物S2?F2、引物S2?R2和探針S2?Probe2組成，核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1—SEQ ID NO:6所示。與其他布魯氏菌核酸檢測方法相比，本發明建立的方法是直接通過熒光信息對布魯氏菌S2疫苗株進行定性、定量，且同時進行分析鑒定，具有便捷、準確、靈敏、特異等優點，大大縮短了檢測時間，對于布魯氏菌病的防控具有重大的應用價值，有助于從源頭控制疫情、有效預防布病疫情的大規模爆發，保障畜牧業的發展和公共衛生安全。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及雙重實時熒光定量PCR鑒定布魯氏菌S2疫苗株的方法及其使用的成套試劑。

背景技術

布魯氏菌病(簡稱布病)是由布魯氏菌(Brucella spp.)引起的一種重要的人畜共患傳染病。布病在畜群和人間布病感染率逐年上升，并在維持在較高水平，持續對公共衛生安全和畜牧業的發展構成危害。

疫苗免疫是流行率較高的地區控制布魯氏菌病的最有效的方法之一。根據原農業部和衛計委印發的《國家布魯氏菌病防治計劃(2016-2020年)》的相關規定，對一類地區的牛羊場群采取全面免疫，奶畜原則上不免疫的措施。我國目前使用的布病疫苗主要有布魯氏菌A19疫苗、布魯氏菌S2疫苗和布魯氏菌M5疫苗。其中布魯氏菌S2疫苗是使用最多的布病疫苗，同時也是唯一一種可以對懷孕動物進行免疫的疫苗。

動物布病的檢測主要以血清學檢測方法為主，但是現有血清學檢測方法與大腸桿菌、耶爾森菌的部分血清型存在交叉反應，同時我國所使用的布病疫苗產生的免疫抗體和野毒株自然感染抗體無法進行區分。截止目前，還沒有一種能快速鑒定布魯氏菌S2疫苗株的鑒定方法。

熒光定量PCR技術(Quantitative Real-time PCR，qPCR)是一種對基因組進行檢測的相對定量技術。與普通PCR技術相比，qPCR增加了一個兩端帶有熒光標記的寡核苷酸探針，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知的模板進行定量分析。熒光定量PCR技術具有靈敏度高、特異性強、重復性好、定量準確的優點，可以利用多種熒光基團實現多種基因的檢測，并可利用寡核苷酸探針實現相似性較高基因的檢測。目前，qPCR已廣泛用于人類傳染病的診斷和病原定量、以及動物病原體的檢測、畜禽產品的檢驗檢疫、生物制品的檢測等領域。因此，基于布魯氏菌S2疫苗株和其它布魯氏菌基因組水平的差異，建立一種準確、特異、快速地鑒定布魯氏菌S2疫苗株的熒光定量PCR方法對于布病的防控具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的是鑒定布魯氏菌S2疫苗株。

本發明首先保護鑒定布魯氏菌S2疫苗株的成套試劑，可為成套試劑2和/或成套試劑1。

所述成套試劑2可包括引物Bru-F1、引物Bru-R1、探針Bru-Probe1、引物S2-F2、引物S2-R2和探針S2-Probe2。

所述成套試劑1可包括所述引物Bru-F1、所述引物Bru-R1、所述探針Bru-Probe1、引物S2-F1、引物S2-R1和探針S2-Probe1。

所述引物Bru-F1的核苷酸序列可如SEQ ID NO:1所示。

所述引物Bru-R1的核苷酸序列可如SEQ ID NO:2所示。

所述探針Bru-Probe1的核苷酸序列可如SEQ ID NO:3所示。

所述引物S2-F2的核苷酸序列可如SEQ ID NO:4所示。

所述引物S2-R2的核苷酸序列可如SEQ ID NO:5所示。

所述探針S2-Probe2的核苷酸序列可如SEQ ID NO:6所示。