[發(fā)明專利]耐受重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株及應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111826316A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳蘭明;許夢婕;單馨影
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/02;C12R1/63
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 范艷靜

本發(fā)明提供了一種耐受重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株及應(yīng)用，該菌株為Vibrio cholerae CHN?Q1?10菌株，保藏編號為：CCTCC NO：M 2020259；其編碼的特異性lolB基因的序列如SEQ ID NO.1；編碼的16S rRNA基因的序列如SEQ ID NO.2；其不攜帶“霍亂”毒素CT和毒素共調(diào)節(jié)菌毛TCP的編碼基因ctxAB、tcpA，以及輔助毒素小帶聯(lián)結(jié)毒素ZOT和附屬霍亂腸毒素ACE的編碼基因zot和ace；且該菌株具有重金屬汞的耐受性；本發(fā)明不僅為我國檢測用微生物參考物質(zhì)提供了新菌種資源，而且為霍亂弧菌進(jìn)化、食品安全，以及環(huán)境污染的研究提供了模式菌株。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水產(chǎn)動物源具有耐受重金屬汞離子的非O1/O139型霍亂弧菌菌株(即Vibrio cholerae CHN-Q1-10)及應(yīng)用。

背景技術(shù)

霍亂弧菌(Vibrio cholerae)是革蘭氏陰性細(xì)菌，隸屬于γ-變形菌門(Gammaproteobacteria)、弧菌目(Vibrionales)、弧菌科(Vibrionaceae)、弧菌屬(Vibrio)。該菌廣泛生存于近岸海域、河口、養(yǎng)殖水域等環(huán)境，并常見于甲殼類和魚類等水產(chǎn)品中。迄今為止，已被鑒定的霍亂弧菌至少分為206個血清型，其中O1和O139血清型產(chǎn)生“霍亂”毒素(Cholera Toxin,CT)和毒素共調(diào)節(jié)菌毛(Toxin-Coregulated Pilus,TCP)，引發(fā)“霍亂”的爆發(fā)與流行。據(jù)文獻(xiàn)報道，大多數(shù)霍亂弧菌環(huán)境分離菌株不攜帶CT和TCP的編碼基因。

在自然環(huán)境中，常見的重金屬污染包括鉛、鉻、汞、鎘、鎳、銅、錳和鋅等。它們難以被生物降解，卻可通過食物鏈(如魚類、貝類、農(nóng)作物等)高度富集。攝食被重金屬污染的水產(chǎn)品可導(dǎo)致人中毒，嚴(yán)重者甚至死亡。

迄今為止，涉及中國“四大家魚”中霍亂弧菌污染的研究鮮有報道，且源自中國“四大家魚”之一的草魚中耐受重金屬汞的非O1/O139型霍亂弧菌菌株未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明從中國產(chǎn)量位居世界淡水養(yǎng)殖魚類第一的草魚(Ctenopharyngodon idellus)中，分離、鑒定得到一株具有重金屬汞耐受性的菌株，經(jīng)鑒定為一株新的非O1/O139型霍亂弧菌菌株，即Vibrio cholerae CHN-Q1-10，從而填補了我國在該領(lǐng)域研究的空白。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種耐受重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株，拉丁文學(xué)名為Vibrio cholerae，菌株名為CHN-Q1-10，該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(China Center for TypeCulture Collection,CCTCC)，中國，武漢大學(xué)；保藏日期為2020年7月1日；保藏編號為：CCTCC NO：M 2020259。

該非O1/O139型霍亂弧菌菌株不攜帶霍亂毒素、毒素共調(diào)節(jié)菌毛的編碼基因ctxAB和tcpA，及輔助毒素小帶聯(lián)結(jié)毒素(Zonula Occludens Toxin，ZOT)、附屬霍亂腸毒素(Accessory Cholera Enterotoxin，ACE)的編碼基因zot和ace，上述檢測均為陰性。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-Q1-10菌株的特異性lolB基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-Q1-10菌株的16S rRNA基因的序列如SEQID NO.2所示。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-Q1-10菌株的重金屬耐受性為汞離子抗性。

一種耐受重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株在檢測和研究微生物中的應(yīng)用。

由于采用上述方案，本發(fā)明的有益效果是：