[發(fā)明專利]耐受抗菌素和重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株及應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111662855A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳蘭明;付惠玉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/63
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 范艷靜

本發(fā)明提供了一種耐受抗菌素和重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株及應(yīng)用，該菌株為Vibrio cholerae CHN?F8菌株，保藏編號為：CCTCC NO：M 2020261；其編碼的特異性lolB基因的序列如SEQ ID NO.1所示；其編碼的16S rRNA基因的序列如SEQ ID NO.2所示；其不攜帶毒素CT和TCP的編碼基因ctxAB、tcpA，以及輔助毒素ZOT和ACE的編碼基因zot和ace；且該菌株具有抗菌素利福平和重金屬汞的耐受性；本發(fā)明不僅為我國檢測用微生物參考物質(zhì)提供了新菌種資源，而且為霍亂弧菌進(jìn)化、食品安全，以及環(huán)境污染的研究提供了模式菌株。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從中國長江入海口表層海水中分離、鑒定得到的耐受抗菌素利福平和重金屬汞的非O1/O139型霍亂弧菌菌株(即Vibriocholerae CHN-F8)及應(yīng)用。

背景技術(shù)

霍亂弧菌(Vibrio cholerae)是革蘭氏陰性細(xì)菌，隸屬于γ-變形菌門(Gammaproteobacteria)、弧菌目(Vibrionales)、弧菌科(Vibrionaceae)、弧菌屬(Vibrio)。該菌生存于近岸海域、河口、養(yǎng)殖水域等環(huán)境，并常見于甲殼類和魚類等水產(chǎn)品中。迄今為止，已被鑒定的霍亂弧菌至少分為206個血清型，其中僅O1和O139血清型產(chǎn)生“霍亂”毒素(Cholera Toxin，CT)和毒素共調(diào)節(jié)菌毛(Toxin-Coregulated Pilus，TCP)，引發(fā)“霍亂”的爆發(fā)與流行。據(jù)文獻(xiàn)報道，大多數(shù)霍亂弧菌環(huán)境分離菌株不攜帶CT和TCP的編碼基因。

在自然環(huán)境中，常見的重金屬污染包括鉛、鉻、汞、鎘、鎳、銅、錳和鋅等。它們難以被生物降解，卻可通過食物鏈(如魚類、貝類、農(nóng)作物等)高度富集。攝入被重金屬污染的水產(chǎn)品可導(dǎo)致人中毒，嚴(yán)重者甚至死亡。

中國長江入海口具有獨特的生態(tài)環(huán)境。研究表明，河流和海洋之間復(fù)雜的相互作用導(dǎo)致入海口成為重金屬的地球化學(xué)捕獲器。迄今為止，涉及中國長江入海口的霍亂弧菌對重金屬耐受性的研究鮮有報道，且源自中國“四大家魚”之一的草魚中耐受重金屬汞的非O1/O139型霍亂弧菌菌株也未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明從中國長江入海口表層海水中分離、鑒定得到一株具有利福平和汞離子耐受性的菌株，經(jīng)鑒定為一株新的非O1/O139型霍亂弧菌菌株，即Vibrio cholerae CHN-F8，從而填補了我國在該領(lǐng)域研究的空白。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種耐受抗菌素和重金屬的非O1/O139型霍亂弧菌菌株，拉丁文學(xué)名為Vibriocholerae，菌株名為CHN-F8，該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(China Center forType Culture Collection,CCTCC)，中國，武漢大學(xué)；保藏日期為2020年7月1日；保藏編號為：CCTCC NO：M2020261。

該非O1/O139型霍亂弧菌菌株不攜帶霍亂毒素、毒素共調(diào)節(jié)菌毛的編碼基因ctxAB和tcpA，及輔助毒素小帶聯(lián)結(jié)毒素(Zonula Occludens Toxin，ZOT)、附屬霍亂腸毒素(Accessory Cholera Enterotoxin，ACE)的編碼基因zot和ace，上述檢測均為陰性。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-F8菌株的特異性lolB基因的序列如SEQID NO.1所示。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-F8菌株的16S rRNA基因的序列如SEQ IDNO.2所示。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-F8菌株的重金屬耐受性為汞離子抗性。

進(jìn)一步地，該非O1/O139型霍亂弧菌CHN-F8菌株的抗菌素耐受性為利福平抗性。