[發明專利]抗SARS-COV-2病毒N蛋白的單鏈抗體及其用途

有效

• 申請號: 202010736672.4
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111875700B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 羅紹祥;王靜;張芳;舒芹;趙愿安
• 申請（專利權）人: 武漢華美生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 江慧

本發明提供了一種抗SARS?COV?2病毒N蛋白的單鏈抗體，所述單鏈抗體能識別SARS?COV?2病毒N蛋白，所述單鏈抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區：所述重鏈可變區具有如SEQ ID NO：1?SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的三個互補決定區；所述輕鏈可變區具有如SEQ ID NO：4?SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的三個互補決定區。所述單鏈抗體與N蛋白結合的EC50為1.339ng/ml。該抗體可以用于新冠抗體檢測試劑盒的質控抗體，經膠體金試劑盒檢測抗體特異性良好，檢測的抗體濃度低至125ng/ml。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種抗SARS-COV-2病毒N蛋白的單鏈抗體及其用途。

背景技術

冠狀病毒隸屬于冠狀病毒科、冠狀病毒屬，是一類單鏈正義RNA病毒。自1937年發現首個病毒至今，共鑒定多種冠狀病毒，分屬于α、β、γ和δ屬，其中有7種冠狀病毒能感染人，分別為α屬的HCoV-229E、HCoV-NL63和β屬的HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV及2019年底鑒定的新型冠狀病毒SARS-CoV-2。

冠狀病毒基因組依次編碼棘突蛋白(Spike protein)、包膜蛋白(Envelopeprotein)、膜蛋白(Membrane protein)和核衣殼蛋白(Nucleocapsid)。其中，棘突蛋白(Spike protein)是冠狀病毒最重要的表面膜蛋白，含有兩個亞基S1和S2。其中S1主要包含有受體結合區(receptorbinding domain，RBD)，負責識別細胞的受體。S2含有膜融合過程所需的基本元件。Spike蛋白承擔病毒與宿主細胞膜受體結合及膜融合功能，是宿主中和抗體的重要作用位點以及疫苗設計的關鍵靶點。SARS-CoV-2的Spike蛋白與人ACE2互作來感染人的呼吸道上皮細胞。核衣殼蛋白(Nucleocapsid)是冠狀病毒中含量最豐富的蛋白。在病毒體組裝過程中，N蛋白與病毒RNA結合并導致螺旋核衣殼的形成。

從冠狀病毒的結構上看，Spike/N蛋白暴露于病毒表面，含有大量的抗原決定簇，可以產生針對病毒的保護性抗體。此外，SARS-CoV-2的核衣殼蛋白有可能誘導特異性T細胞免疫反應，對拮抗病毒感染也具有重要作用。

單鏈抗體(single chain antibody fragment，scFv)，是由抗體重鏈可變區和輕鏈可變區通過15～20個氨基酸的短肽(linker)連接而成。scFv單鏈抗體的優點：可去除非特異性反應的競爭性表面蛋白，腫瘤顯象背景更加清晰性；免疫源性小，可消除人抗鼠的排異反應；在體內循環的半衰期短，易清除，利于解毒排出；易于與毒素或酶基因連接，便于直接獲得免疫毒素或酶標抗體等。目前普遍認為，針對感染性病原微生物的檢測，通過雙抗體夾心法檢測抗原是一直以來比較推崇的檢測方法，可以一定程度的彌補PCR檢測過程耗時長、檢測流程復雜的問題，同時能一定程度的避免抗體檢測假陽性以及檢測窗口期的問題。基于此，針對性的開發特異性抗體對用于SARS-CoV-2病原微生物抗原檢測，對于完善檢測手段、豐富檢測方法，提高檢測結果的準確度、靈敏度和特異性有著非常重要的幫助。

因此，亟需開發用于針對SARS-COV-2病毒N蛋白的單鏈抗體。

發明內容

為了解決所述技術問題，本發明提供了一種抗SARS-COV-2病毒N蛋白的單鏈抗體及其用途，可以特異性識別SARS-COV-2病毒N蛋白，所述單鏈抗體與N蛋白結合的EC50為1.339ng/ml。該抗體可以用于新冠抗體檢測試劑盒的質控抗體，經膠體金試劑盒檢測抗體特異性良好，檢測的抗體濃度低至125ng/ml。

第一方面，本發明提供了抗SARS-COV-2病毒N蛋白的單鏈抗體，所述單鏈抗體能識別SARS-COV-2病毒N蛋白，所述單鏈抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區：

所述重鏈可變區具有如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的三個互補決定區；