[發明專利]一種檢測三氯殺螨醇的酶聯免疫試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010735972.0
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN114002434A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 智軍海;申屠獻忠;周嘉明;封冰;孟超
• 申請（專利權）人: 華測檢測認證集團股份有限公司;華測檢測認證集團北京有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測三氯殺螨醇的酶聯免疫試劑盒，它包括：包被有三氯殺螨醇包被抗原的酶標板、三氯殺螨醇單克隆抗體、酶標記抗抗體、三氯殺螨醇標準品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、復溶液。本發明還公開了一種應用上述酶聯免疫試劑盒檢測三氯殺螨醇的方法，它包括：首先對樣品進行前處理，然后用試劑盒進行檢測，最后對檢測結果進行分析。本發明提供的酶聯免疫試劑盒可用于檢測蔬菜、水果、茶葉中三氯殺螨醇的殘留量，其具有快速、操作簡便、成本低、靈敏度高、特異性強等諸多優點，適宜基層實驗室的大批量樣品檢測和對農產品進行田間現場快速篩選，能夠實現從源頭上控制污染農產品的流通。

技術領域

本發明涉及酶聯免疫簡寫技術領域，具體涉及一種用于檢測三氯殺螨醇的酶聯免疫試劑盒，其特別適于蔬菜、水果和茶葉樣品中三氯殺螨醇的檢測。

背景技術

三氯殺螨醇(dicofol),化學名稱2,2,2-三氯-1,1-雙(4-氯苯基)乙醇，別名開樂散，是一種廣譜、低毒、高效的有機氯殺螨劑，對有害螨具有較強的觸殺和胃毒作用，無內吸作用，對成螨、若螨、幼螨和螨卵都有良好的防治效果，殘效較長，并)且生產工藝較簡單，成本低廉，因此在農業生產中曾推廣應用過。但三氯殺螨醇性質穩定,在自然條件下不易降解，該藥施藥1年后作物仍有少量殘留，而且經數年使用后，能使某些害螨對該藥產生不同程度的抗藥性，并且對人、畜等有低等毒性。因此，世界上部分國家規定禁止三氯殺螨醇在茶樹及蔬菜上使用。我國茶葉出口因三氯殺螨醇殘留超標而被退回或銷毀的現象屢有發生，給茶葉產業造成了很大的損害。因此，要保障農產品的品質，必須要控制好種植過程的農藥使用，并結合高效快速的監控檢測手段。

目前三氯殺螨醇檢測方法有氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜—質譜法等儀器法，上述方法可以保證數據精確性和準確性，但所需儀器昂貴，檢測成本高，檢測周期長，樣品前處理流程復雜，且對操作人員要求較高，不適宜基層實驗室的大批量樣品檢測。膠體金免疫層析試紙條和時間分辨熒光試紙條可以滿足快速檢測的要求，但是由于上述方法檢測靈敏度低、準確性差、只能進行定性檢測，并且結果判讀存在較大主觀性等缺點。因此，開發一種快速、高效、靈敏度高、特異性強、不受檢測設備限制且能夠實現對大批量樣品進行現場定量或半定量檢測的產品和方法成為迫切需要解決的問題。

發明內容

為了克服上述現有技術的不足，本發明提供了一種結構簡單、使用方便、價格便宜、便于攜帶的用于三氯殺螨醇殘留量檢測的酶聯免疫試劑盒，并提供了一種高效、準確、簡便、適于大批量樣品篩選的定量或半定量檢測方法。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下。

本發明的檢測三氯殺螨醇的酶聯免疫試劑盒，包括：包被有三氯殺螨醇包被抗原的酶標板、三氯殺螨醇單克隆抗體、酶標記抗抗體、三氯殺螨醇標準品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、復溶液。所述三氯殺螨醇單克隆抗體是以三氯殺螨醇免疫抗原為免疫原制備獲得。所述三氯殺螨醇免疫抗原是由三氯殺螨醇半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白。所述三氯殺螨醇包被抗原是由三氯殺螨醇半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白為雞卵清白蛋白。所述三氯殺螨醇半抗原是由三氯殺螨醇原藥在堿性條件下與琥珀酸酐反應得到。

所述抗抗體為兔抗鼠抗抗體。

所述酶標記抗抗體是采用改良過碘酸鈉法將標記酶與抗抗體進行偶聯得到，所述酶標記抗抗體的標記酶為辣根過氧化物酶，所述底物顯色液由A液和B液組成，A液為過氧化脲，B液為四甲基聯苯胺，所述終止液為1-2mol/L硫酸溶液。

為了更方便現場檢測和大量樣品篩查，所述試劑盒還包括三氯殺螨醇標準品、底物顯色液、終止液、洗滌液、復溶液。

所述三氯殺螨醇標準品溶液6瓶，濃度分別為0、0.5、1.5、4.5、13.5、40.5mg/L。

所述洗滌液優選為pH值7.4，含有0.1％-0.5％吐溫-20、0.01％-0.03％疊氮鈉的0.1-0.3mol/L磷酸鹽緩沖液。