[發明專利]一種多指標快速檢測熒光免疫層析試劑盒

在審

• 申請號: 202010735295.2
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111879946A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 胡文波
• 申請（專利權）人: 江蘇揚新生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558
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本發明涉及一種多指標快速檢測熒光免疫層析試劑盒，該試劑盒包含檢測卡中的熒光墊上涂覆有熒光微球標記抗體的涂層，所述的抗體為C?反應蛋白、髓過氧化物酶和心臟脂肪酸結合蛋白的單克隆抗體；本發明優化了活化劑配比等參數，實現上述三標志物同時更靈敏、更快捷、更準確檢測的需求。

技術領域

本發明涉及生物技術檢測領域，具體涉及一種同時檢測3個標志物的檢測更快捷、更方便的熒光免疫層析試劑盒。

背景技術

熒光免疫層析法檢測試劑屬于POCT類(point-of-care testing，即時檢測或床旁檢測) 檢測產品，因具有檢測方便、快捷、綜合成本低等特點，在臨床上得到廣泛應用。然而，人體的復雜性決定了單一生物標記物難以及時、準確地全面反映受試者身體狀況，往往需要同時進行多項檢測，再綜合判斷。門診量大是我國醫療衛生系統的一大特點，也是產生醫患矛盾的一個誘因，無論是醫生還是輔助部門都面臨很大的工作壓力。將多個標記物聯合到一個試劑盒中檢測，無疑會減少很多重復勞動，大大提高檢驗效率，從而加快臨床醫生的診治效率。

多指標聯合檢測不但有助于緩解醫患矛盾，更有利于保護患者的生命健康。尤其是在心血管疾病領域，心梗、腦梗這類急重癥死亡率及致殘率均超過40％，嚴重威脅患者生命安全，給其家庭乃至社會都帶來巨大的經濟負擔和精神痛苦。如何在急癥發生前盡快診斷出患者的發病風險，從而采取有效救治措施是減少、甚至避免悲劇發生的關鍵。多指標聯合檢測試劑盒是提高臨床診療效率及患者預后水平的得力助手，但同時檢測多個標記物在技術上存在一定難度，不同標記物的性質特點都不同，適用于不同的體系，相互之間會形成干擾，尤其是靈敏度更高的熒光法檢測試劑盒。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，目前心血管疾病領域缺乏具有更高靈敏度及準確性且具有早期預警方面功能的多指標聯合檢測產品。

為解決以上技術問題，本發明提供一種可以在保證靈敏度及準確性的情況下，同時檢測出血液中的C-反應蛋白、髓過氧化物酶和心臟脂肪酸結合蛋白三個標記物的熒光免疫層析檢測試劑盒，具體技術方案如下：

本發明所述熒光免疫層析試劑盒包含檢測卡，該檢測卡包括樣品墊、熒光墊、具有檢測線和質控線的檢測墊、吸樣墊及底板。其中，所述熒光墊上涂覆有熒光微球標記抗體的涂層，所述的抗體為C-反應蛋白、髓過氧化物酶和心臟脂肪酸結合蛋白的單克隆抗體；該抗體標記過程中所用的活化劑為EDC和NHS，熒光微球與兩活化劑的用量比為1: (14-16):(14-16)；所述的檢測線有3條，分別為能夠與所述涂層中熒光微球標記抗體特異性結合的配對抗體或抗原形成的涂層。

所述的檢測卡還包括疏水性外殼，該外殼上設有加樣孔及檢視窗。所述的樣品墊、熒光墊、檢測墊、吸樣墊和底板組成的試紙條固定在該外殼內。所述的加樣孔位于所述樣品墊上方，所述檢視窗位于所述檢測墊上方。

上述的C-反應蛋白(CRP)和髓過氧化物酶(MPO)均是心腦血管疾病的預警標志物，可以通過其含量變化來評估發生心腦血管急重癥的風險。所述的心臟脂肪酸結合蛋白(hFABP)是特異性強且靈敏度很高的心肌損傷標記物，可以在無癥狀或輕微心絞痛癥狀時檢測出心肌損傷狀況。該三標記物聯合檢測，可以更為快捷、更為準確的評價受試者發生心梗等惡性事件的風險，為治療爭取了寶貴時間。

熒光免疫層析檢測產品的原理及其結構為公知技術，實現對不同檢測對象的檢測主要是通過調整工藝部分實現，其中以試劑種類、濃度、pH值、配比等參數的選擇尤為重要，由于工藝步驟和涉及試劑繁多，所以工藝篩選優化的工作很難通過一一實踐的方法得到，而是需要對實驗方案及其結果進行深入分析并在此基礎上進行嘗試摸索。尤其是多指標同時檢測的產品，標記物抗體的性質差異使其具有各自事宜的緩沖系統、用量配比。實現三者間互不干擾且準確檢測出其含量，是無法依據常用單個指標檢測產品的技術簡單調整，或有限次嘗試完成的。化學物質間的相互作用還有很多是我們目前科技所不了解的，試驗過程中經常會出現理論可行，但結果不理想的狀況。