[發明專利]一種陽離子脂質體禽流感疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 202010735140.9
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN112336855B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 張亮;孫飛躍;王亞萍
• 申請（專利權）人: 江蘇飛陽益科生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K39/39;A61K47/18;A61K9/127;A61K47/24;A61K47/28;A61P31/16
• 代理公司: 蘇州智品專利代理事務所(普通合伙) 32345
• 代理人: 唐學青

本申請公開一種陽離子脂質體禽流感疫苗的制備方法。該方法基于荷載十八胺陽離子脂質體制備出的疫苗，可明顯提高抗原提呈細胞對抗原的提呈能力,能引發CD4+與CD8+T細胞反應，誘導產生強炎癥反應，提高記憶T細胞的感應并增加其維持能力，疫苗的粒徑約450nm，疫苗的包封率均在50％以上，在某些抗原濃度抗原下，包封率均超過70％,隨著抗原濃度的提高,包封率逐步提高。

技術領域

本申請涉及生物技術領域，具體的涉及一種荷載十八胺的陽離子脂質體禽流感疫苗及其制備方法。

背景技術

佐劑是指能增強機體抗原免疫應答或改變免疫應答類型的物質，其主要作用是為了增強機體免疫系統的反應強度和持久性。現有疫苗佐劑多為油佐劑或鋁膠佐劑，存在局部刺激大、不良反應多、疫苗穩定性差、效力不高等問題。國內白油佐劑工藝不高，質量不穩定，目前我國疫苗企業使用的佐劑主要依賴進口，造成疫苗制劑的生產成本大幅度提高和產品價格上漲。因此，研制新型疫苗佐劑是提高疫苗安全、效力的重要途徑，也是打破國外行業壟斷的必由之路。此外，現有疫苗佐劑產生免疫保護率低、免疫期短，同時油乳劑不易被機體吸收并有刺激性，容易導致注射部位紅腫或潰爛等副作用，影響動物產品的品質。隨著人們對食品安全的高度關注，開發高效、安全、綠色的新型納米佐劑具有廣闊的應用前景。

禽流感(Avian influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的一種以禽類為主要感染群體的呼吸道疾病,該病危害養禽及相關產業持續發展的同時,也威脅著人類的健康。H9N2亞型禽流感病毒從20世紀90年代開始在世界范圍內流行,一般情況下不能引起禽嚴重的臨床癥狀,但易引起其他病原繼發感染,增加禽死亡率。近年來,對我國部分活禽市場及發生呼吸道感染的蛋雞、肉雞開展H9N2亞型禽流感病原檢測,發現H9N2亞型的陽性率高達60％以上,說明H9N2亞型禽流感在我國廣泛存在。目前，H9N2亞型禽流感滅活疫苗主要是由滅活的H9N2亞型禽流感病毒液后的半成品與油佐劑以適當比例混合配置而成，但油佐劑不良反應嚴重，皮下注射會引起炎癥、潰瘍和肉芽腫，并且油類物質長期潴留于組織中不易代謝，造成禽類肉制品的食品安全問題。因此，開發高效低毒的新型禽流感納米疫苗佐劑就顯得十分迫切和必要。

發明內容

為克服上述缺陷，本申請的目的在于：提出一種基于荷載十八胺的陽離子脂質體佐劑的禽流感疫苗及其制備方法。該佐劑通過荷載十八胺制備的陽離子納米脂質體，該脂質體兼具佐劑和遞送系統的功能，作為遞送系統可荷載禽流感疫苗抗原，可明顯提高抗原提呈細胞對抗原的提呈能力。

為了達到以上目的，本申請如下技術方案：

一種陽離子脂質體禽流感疫苗的制備方法，其特征在于，

所述制備方法包含如下步驟：

S1、將大豆磷脂、膽固醇、PEG500-DSPE及十八胺按照一定的比例溶解于有機溶劑中,以制備荷載十八胺的陽離子脂質體，

S2、將H9N2型流感病毒裂解疫苗原液加入到制備的荷載十八胺的陽離子脂質體中并進行充分混合，以制成脂質體禽流感疫苗。

在一較佳的實施方式中，該步驟S1中，還包括在真空度介于0.05～0.15MPa及轉速150r/min條件下，真空旋轉蒸發混合液第一預預設時間。

在一較佳的實施方式中，該步驟S1中大豆磷脂、膽固醇、PEG500-DSPE及十八胺的微摩爾比例為54：23：4：2.5。

在一較佳的實施方式中，該步驟S2中包括：在30-40℃的環境溫度下充分攪拌混合,使得充分攪拌后無有機溶劑殘留。

在一較佳的實施方式中，該步驟S2之后還包括，充分混合后制備的脂質體禽流感疫苗通過碳酸纖維膜篩選粒徑。