[發明專利]一種同時分析利拉魯肽及其Boc-利拉魯肽主鏈的色譜方法

在審

• 申請號: 202010734182.0
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN113984911A
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: 陳衛;吳松;張振山;涂建飛
• 申請（專利權）人: 寧波鯤鵬生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54;G01N30/74
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;馬思敏

1.一種同時分析利拉魯肽及其Boc-利拉魯肽主鏈的RP-HPLC色譜方法，其特征在于，將含有利拉魯肽及Boc-利拉魯肽主鏈的樣品溶液注入高效液相色譜儀，并采用如下高效液相色譜條件進行檢測；

鍵合硅膠色譜柱；

流動相：流動相A為0.05mol/mL-0.15mol/mL磷酸二氫銨水溶液，

流動相B為乙腈；

其中，流動相B體積占比為15％→95％進行梯度洗脫。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相B體積占比為25％→90％。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述鍵合基團選自：C8、C18。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜條件還包括：

進樣體積：10-100μL。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜條件還包括：

檢測波長：210-230nm；

流速：0.5-1.0mL/min；

柱溫：30-40℃。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，流動相A磷酸二氫銨水溶液的pH為3.5-4.0。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有利拉魯肽及其Boc-利拉魯肽主鏈的樣品溶液是通過如下步驟制備的：

(s1)重組菌發酵得到菌體，

(s2)對所述菌體進行破碎、離心、溶解得到大分子蛋白，

(s3)加入蛋白酶進行切割所述大分子蛋白，得到Boc-利拉魯肽主鏈，

(s4)對所述Boc-利拉魯肽主鏈進行化學修飾，得到含有利拉魯肽及其Boc-利拉魯肽主鏈的樣品溶液。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟：

(s5)標準溶液的制備：將已知濃度的利拉魯肽標準品溶液和經過純化得到的Boc-利拉魯肽主鏈溶液混合，得到已知濃度的標準品溶液。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，樣品溶液的進樣濃度為0.05～1.5mg/mL。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫，洗脫時間及流動相B體積占比為0～20min從25％→60％，20～35min從60％→90％，35～40min再從90％→25％，然后25％運行至10min。