[發(fā)明專利]一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA引物及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010734176.5
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111808994A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余乃通;劉志昕;李俊成;高圣風(fēng)
• 申請（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

1.一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA引物，其特征是，所述RPA引物是基于外殼蛋白基因設(shè)計(jì)，RPA引物的核苷酸序列為：

上游引物BSGFV-RPA-F：CTTGGCAAAATTGGAAGGATCTAGATTACC SEQ ID NO.2；

下游引物BSGFV-RPA-R：CTTAGATGATGAATTGGCTCTTCCAC SEQ ID NO.3；

擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為401bp。

2.一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA試劑盒，其特征是，所述RPA試劑盒包括2條針對外殼蛋白基因設(shè)計(jì)的特異性引物以及探針；所述RPA引物的核苷酸序列為：

上游引物BSGFV-RPA-F：CTTGGCAAAATTGGAAGGATCTAGATTACC SEQ ID NO.2；

下游引物BSGFV-RPA-R：CTTAGATGATGAATTGGCTCTTCCAC SEQ ID NO.3；

擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為401bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA試劑盒，其特征是，所述探針的核苷酸序列為P：

CTGTCTTCATACTCTCGATCTTAGAACT(FAM-dT)(dSpacer)A(BHQ1-dT)AATTGCAGGAGCAGGAATTACAGCTC-C3spacer；

其中，探針P在第28個(gè)bp位置添加有(FAM-dt)基團(tuán)和(dspacer)修飾，在第29個(gè)bp位置添加有(BHQ1-dT)基團(tuán)，在尾部添加有(C3spacer)修飾。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA試劑盒，其特征是，所述RPA試劑盒還包括RPA反應(yīng)擴(kuò)增體系：總量為50μL，4μL上游引物BSGFV-RPA-F、4μL下游引物BSGFV-RPA-R、2μL探針P、100ng的核酸模板、再水化緩沖液(Rehydration Buffer)29.5μL、2.5μL醋酸鎂溶液(280mmol/L)、余量為去離子水。

5.一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA檢測方法，其特征是，包括以下步驟：

S1：基于香蕉條斑病毒GF分離物的外殼蛋白基因設(shè)計(jì)特異性RPA引物；所述RPA引物的核苷酸序列為：

上游引物BSGFV-RPA-F：CTTGGCAAAATTGGAAGGATCTAGATTACC SEQ ID NO.2；

下游引物BSGFV-RPA-R：CTTAGATGATGAATTGGCTCTTCCAC SEQ ID NO.3；

擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為401bp；

S2：提取待測樣品中的總DNA；

S3：以S2中的總DNA為模板，采用S1中的RPA引物進(jìn)行RPA擴(kuò)增反應(yīng)；

S4：分析RPA擴(kuò)增產(chǎn)物，得出檢測結(jié)果。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA檢測方法，其特征是，所述RPA擴(kuò)增反應(yīng)溫度為39℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA引物及檢測方法，其特征是，所述RPA擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)間為30min。

8.權(quán)利要求1所述的一種用于檢測香蕉條斑病毒GF分離物的RPA引物在香蕉條斑病檢測中的應(yīng)用。