[發明專利]文昌魚感染細菌的蛋白標記物及其應用

在審

• 申請號: 202010734159.1
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111965368A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 張海麗;楚德昌;吳蕾;李炎桂;王晗
• 申請（專利權）人: 菏澤學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明公開了文昌魚感染細菌的蛋白標記物，包括CaVPT、SCP、CAVP和CK。所述細菌為革蘭氏陽性細菌或/和革蘭氏陰性細菌。所述文昌魚感染細菌的蛋白標記物在檢測文昌魚感染細菌中的應用，在制備用于檢測文昌魚感染細菌的檢測試劑盒中的應用。本發明還公開了一種文昌魚感染細菌的檢測方法：用蛋白質組學方法檢測體液中CaVPT、SCP、CAVP和CK四種蛋白的含量，并與正常未感染細菌的文昌魚的體液中這四種蛋白的含量相對比。本發明通過實驗研究發現，CaVPT、SCP、CAVP和CK四種蛋白質在文昌魚先天免疫反應中起著極其重要的功能，可以用于蛋白質組功能的研究、文昌魚感染細菌的檢測等。本發明為文昌魚響應細菌感染免疫應答相關的蛋白質組的研究具有重要的參考價值。

技術領域

本發明涉及文昌魚響應細菌感染的功能蛋白質組的生物標記物及其應用，屬于生物標記 物技術領域。

背景技術

蛋白質組(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出，指由一個基因組(Genome)，或一 個細胞、組織表達的所有蛋白質(protein)。蛋白質組學集中于動態描述基因調節，對基因表 達的蛋白質水平進行定量的測定，鑒定疾病、藥物對生命過程的影響，以及解釋基因表達調 控的機制。

文昌魚是文昌魚屬(Branchiostoma)動物的總稱，又稱蛞蝓魚。脊索動物，文昌魚綱， 文昌魚目，文昌魚科。長約50mm。形似小魚，無頭，兩端尖細。體側扁，半透明，脊索貫 穿全身。前端有眼點。口藏于口笠內，口笠邊緣有38～50條緣膜觸手。具背、臀和尾鰭。腹 部有1對腹褶。雌雄異體，生殖腺左右成對排列。棲息于疏松沙質海底，常鉆在沙內，僅露 出前端，濾食硅藻及小型浮游生物。春末夏初繁殖，幼魚經短暫浮游期后即鉆入沙中成長。 分布于中國河北東部、青島、煙臺、廈門、合浦沿海。文昌魚是無脊椎動物進化至脊椎動物 的過渡類型，也是研究脊索動物演化和系統發育的優良科學實驗材料，具重要科學價值。

文昌魚作為古代脊索動物譜系的幸存者，是比較基因組、蛋白質組研究的模式生物。然 而，調節文昌魚響應細菌感染免疫應答相關的蛋白質組在很大程度上尚不清楚。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了文昌魚響應細菌感染的功能蛋白質組的生物標記物， 及其在檢測文昌魚感染細菌中的應用。本發明采用2-DE結合MALDI-TOF/TOF質譜分析技術分 離鑒定經金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌感染和免疫后文昌魚體液的差異表達蛋白，通過模式 識別方法揭示其變化規律，旨在揭示文昌魚應答細菌感染的蛋白質組機制。

本發明是通過以下技術方案實現的：

文昌魚感染細菌的蛋白標記物，包括CaVPT、SCP、CAVP和CK。

所述細菌為革蘭氏陽性細菌或/和革蘭氏陰性細菌。

所述革蘭氏陽性細菌選自金黃色葡萄球菌；所述革蘭氏陰性細菌選自副溶血弧菌。

所述文昌魚感染細菌的蛋白標記物在檢測文昌魚感染細菌中的應用(非診斷目的)。

所述文昌魚感染細菌的蛋白標記物在制備用于檢測文昌魚感染細菌的檢測試劑盒中的應 用。

一種非診斷目的文昌魚感染細菌的檢測方法，包括以下步驟：

(1)提取待檢測文昌魚的體液，提取其中的蛋白；

(2)用蛋白質組學方法檢測CaVPT、SCP、CAVP和CK四種蛋白的含量，并與正常未感染 細菌的文昌魚的體液中這四種蛋白的含量相對比，所得對比結果可以用于輔助判斷文昌魚是 否感染細菌，判斷標準為：若：CaVPT上調表達，CaVP和SCP下調表達，CK下調表達，則表明該待檢測文昌魚感染細菌。