[發明專利]一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010733449.4
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111896743A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 李小艷;李文葉;黃玲;張雪嬌;舒芹;趙愿安
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

本發明公開了一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用，包括順次搭接的樣品墊、熒光墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線T和質控線C，其中所述硝酸纖維素膜上還包被有位于檢測線T和質控線C之間的檢測線T2，檢測線T和檢測線T2中的抗體種類相同，并且檢測線T和檢測線T2中的抗體濃度為1:1.2～3。本發明通過在增加檢測線T2，使檢測線T中未反應完的微球?抗體?待測抗原復合物被T2中的抗體捕獲，并調節T和T2中的抗體濃度，使得在計算待測樣本濃度時，(T峰+T2峰)信號/C峰信號的拉開梯度更大，并且定標曲線模型的上端呈上升趨勢，從而得到一種線性范圍更寬且高端測值精密度更高的熒光免疫層析試紙條。

技術領域

本發明屬于免疫層析檢測分析技術領域，具體涉及一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

熒光免疫層析技術是基于抗原抗體特異性免疫反應的新型膜檢測技術。該技術以固定有檢測線(包被抗體或包被抗原)和質控線(抗抗體)的條狀纖維層析材料為固定相，測試液為流動相，熒光標記抗體或抗原固定于熒光墊，通過毛細管作用使待分析物在層析條上移動。對于帶有多個抗原決定簇的大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)，通常采用“三明治”型雙抗夾心免疫層析方法，即待測物在流動相作用下先與熒光標記抗體結合，當到達檢測線時再與包被抗體結合形成雙抗夾心的“三明治”型。熒光層析試紙條具備使用方便快速，成本低，應用范圍廣的特點，可適應多種檢測條件，因此廣泛用于臨床檢測，如C反應蛋白、血清淀粉樣蛋白A、糖化白蛋白、肌紅蛋白、微量白蛋白和降鈣素原等物質的測定。

如專利CN102023211B公開了一種全程定量檢測C反應蛋白的免疫層析試紙條，所述試紙條由樣品墊、標記墊、包被膜、吸水紙順次搭接粘貼在底板上構成，所述標記墊上包被有熒光膠乳微粒標記的CRP單克隆抗體和熒光膠乳微粒標記的兔IgG；所述包被膜包括檢測區和質控區，所述檢測區包被有與所述熒光膠乳微粒標記的CRP單克隆抗體處于不同表位的另一種CRP單克隆抗體。專利CN109085358A公開了一種血清淀粉樣蛋白A(SAA)測定試劑盒(免疫層析法)及制作方法，試劑盒包括免疫層析試紙條和塑料外殼，所述免疫層析試紙條是由底板、樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊組成的試紙條，所述樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次交錯固定于所述底板上，所述試劑墊包被有鼠抗人SAA單克隆抗體標記的彩色熒光微球，硝酸纖維素膜上的檢測線包被有兔抗人SAA多克隆抗體，質控線包被有山羊抗鼠多克隆抗體，所述單克隆抗體為純化后混合的單克隆抗體，來源于針對2-6個不同的SAA抗原表位的單克隆抗體細胞株，采用彩色熒光微球可以快速得到定性結果并稍遲得到定量結果。然而現有的免疫層析試紙條上只有一條檢測線，當樣本中抗原較多時，T線信號達到飽和難以上升，測試信號T/C線性上端趨于平緩，因此會出現檢測線的線性范圍過窄，測試高端的檢測值不準確的問題。

發明內容

本發明針對現有技術存在的缺陷，提供了一種熒光免疫層析試紙條，通過在檢測線T和質控線C之間增加一個檢測線T2，使T中未反應完的微球-抗體-待測抗原復合物被T2中的抗體捕獲，并調節T和T2中包被的抗體濃度，從而得到一種線性范圍更寬且高端測值精密度更高的熒光免疫層析試紙條。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種熒光免疫層析試紙條，包括順次搭接的樣品墊、熒光墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線T和質控線C，其中所述硝酸纖維素膜上還包被有位于檢測線T和質控線C之間的檢測線T2，其中所述檢測線T和所述檢測線T2中的抗體種類相同，并且所述檢測線T和所述檢測線T2中的抗體濃度為1:1.2～3。