[發明專利]一種副溶血性弧菌培養基、培養方法與應用

在審

• 申請號: 202010732442.0
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111676179A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 胡智愷;索一平;宋麗萍;王丹;蔡雪鳳;任巖;劉凱;張躍川;鞏有博;畢思丹
• 申請（專利權）人: 北京市食品安全監控和風險評估中心（北京市食品檢驗所）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/689;C12R1/63
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及食品病菌檢測技術領域，具體公開了一種副溶血性弧菌培養基、培養方法與應用。本發明副溶血性弧菌培養基的氮源按用量由大到小依次包括牛心浸粉、酵母浸粉和大豆蛋白胨。以該培養基進行培養的具體條件為：35?37℃，pH值7.5?8.0，160?200rpm有氧培養。該培養方法無需添加除氮源外的其他營養組分，即能促進微生物對受損區域的修復，保證細胞膜的通透性，實現副溶血性弧菌的快速有效增殖，為真正實現食源性致病菌的快速檢測提供了有力的技術支持。

技術領域

本發明涉及食品病菌檢測技術領域，具體地說，涉及一種副溶血性弧菌培養基、培養方法與應用。

背景技術

隨著對食品安全的關注度逐漸提高，對食源性致病菌檢測的速度和精準度都提出了更高的要求。PCR技術的出現實現了食源性致病菌下游檢測速度的大幅提升。目前，食源性致病菌上游檢測的前增菌過程已經成為真正實現食源性致病菌快速檢測的瓶頸。副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus)是一種革蘭氏陰性嗜鹽弧菌，廣泛分布于河口和海洋環境里，是由海鮮引起的細菌性胃腸炎的主要病因，常與食用生的或未煮熟的海鮮有關。隨著副溶血性弧菌呈現感染不斷上升的趨勢，對其的快速檢測需求越來越大。

目前的副溶血性弧菌檢測在第一步前增菌階段就需要8～18小時，嚴重阻礙了食源性致病菌快速檢測的速度。此外，副溶血性弧菌是嗜鹽嗜堿無芽孢的弧菌。其中，鹽度對副溶血性弧菌的存活至關重要。在無氯化鈉的環境中副溶血性弧菌不易存活或微弱生長。且由于食品體系成分復雜，干擾副溶血性弧菌生長的因素較多，加之在運輸、儲藏過程中會造成副溶血性弧菌菌體受損甚至衰亡，導致副溶血性弧菌檢出率低。前增菌是使受損的菌體復蘇，從而利于提高檢測準確性，但若前增菌過程不合理也將影響檢驗的時效性。因此，開發有效的前增菌方案是提高副溶血性弧菌檢驗時效性和準確性的關鍵。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種可有效提升副溶血性弧菌增殖效率的培養基。

為了實現該目的，本發明的技術方案如下：

一種副溶血性弧菌培養基，所述培養基的氮源按用量由大到小依次包括牛心浸粉、酵母浸粉和大豆蛋白胨。

本發明經大量研究發現，采用牛心浸粉、酵母浸粉和大豆蛋白胨這三種特定組分，按用量依次由大至小共同作為培養副溶血性弧菌時的氮源，可無需添加其他營養組分，即能促進微生物對受損區域的修復，保證細胞膜的通透性，實現副溶血性弧菌的快速有效增殖。而換用其他氮源組合方式，效果均不理想。

本發明中，所述牛心浸粉、所述酵母浸粉和所述大豆蛋白胨的質量比為(1.8-4.5)：(1.1-2.4)：1，優選為(2.6-3)：(1.1-1.5)：1，更優選為2.78：1.32：1。

進一步地，當牛心浸粉、酵母浸粉和大豆蛋白胨以本發明的特定比例配合使用時，可發揮更好的培養效果。既能在優于現有標準方法規定的時間內使目標菌快速繁殖以達到檢測限，又能覆蓋到不同類型的樣品，避免了假陰性的結果。且該方案的原料方便易得，無有毒有害物質。按照該比例制成的前增菌液能夠使受損失的副溶血性弧菌快速修復，是修復副溶血性弧菌的優選配比。且添加的牛心浸粉和酵母浸粉能夠與大豆蛋白胨的營養成分形成更好的增效作用。尤其是在優選比例下效果更佳。偏離本發明比例時將既影響副溶血性弧菌的修復效果，又會造成原料資源無效使用。此外，本發明方案也為解釋副溶血性弧菌營養特性需求提供技術支持，為控制副溶血性弧菌提供了理論參考。

本發明中，所述牛心浸粉的濃度為(18.4-22.8)g/L，優選為20.6g/L；

和/或，所述酵母浸粉的濃度為(7.6-12.0)g/L，優選為9.8g/L；

和/或，所述大豆蛋白胨的濃度為(5.1-10.1)g/L，優選為7.4g/L。

本發明培養基中各組分濃度適宜，可維持理想的滲透壓，既提升了培養效果，又節約了成本，避免原料浪費。