[發明專利]一種腺苷脫氨酶測定試劑盒

有效

• 申請號: 202010727103.3
• 申請日: 2020-07-26
• 公開（公告）號: CN111662955B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 馬全新;吳艷芳;謝小麗
• 申請（專利權）人: 武漢中太生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/48;C12Q1/26;C12Q1/28
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

一種腺苷脫氨酶測定試劑盒，由彼此獨立的試劑R1和試劑R2組成；所述試劑R1的組分包括：緩沖液、防腐劑、保護劑、抗干擾劑、表面活性劑、反應增強劑、過氧化物酶、嘌呤核甘磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、4?氨基安替比林和水；所述試劑R2的組分包括：緩沖液、保護劑、反應增強劑、防腐劑、腺苷、色原物質和水。本發明分析靈敏度高，線性可高達300U/L以上，重復性好，抗干擾能力強。

技術領域

本發明涉及醫學及生物化學技術領域，具體是一種測定腺昔脫氨酶的試劑盒。

背景技術

腺昔脫氨酶(adenosine?deaminase，ADA)是瞟嶺核昔代謝中重要的酶類，是一種與機體細胞免疫活性有重要關系的核酸代謝酶。其活性是反映肝損傷的敏感指標，可作為肝功能常規檢查項目之一，與ALT或GGT等組成肝酶語能較全面地反映肝臟病的酶學改變。血清中的ADA活性測定可用于:判斷急性肝損傷及殘留病變:協助診斷慢性肝病:有助于肝纖維的診斷:有助于黃癥的鑒別。此外，ADA活性缺乏與重癥聯合免疫缺陷病(SC1D)有關，作為核酸代謝重要的酶類，ADA缺乏可導致核酸代謝障礙，影響到胸腺的發育，從而引起免疫功能缺陷。腦脊液ADA檢測可作為中樞神經系統疾病診斷和鑒別診斷的重要指標。ADA在良惡性難辨的滲出液鑒別診斷上也具有重要價值。因此，測定血液、體液中的ADA及其同工酶水平對這些疾病的鑒別、診斷、治療及免疫功能的研究日趨受到臨床重視。

近十幾年來，隨著對ADA的深入研究，檢測方法也不斷發展。目前比色法己發展了五代。

第一代ADA測試：ADA將腺苷(Adenosine)脫氨產生次黃苷(Inosine)和氨(NH3)。通過動態測量腺苷265nm處吸光度下降的速度，測算ADA的活性大小。但是該法高底物濃度造成吸光度過高，僅適用于腺苷濃度低于40.00μmol/L。如此低的底物濃度達不到底物飽和要求，造成ADA活性檢測失真。因此，該法不適用于臨床應用。

第二代ADA測試:原理為腺苷脫氨酶催化腺嘌呤核苷水解，產生次黃嘌呤核苷和氨。然后用Berthelot顯色反應測定反應過程中產生氨的量，從而計算血清ADA活性單位。該法所需試劑易配制，儀器簡單，但靈敏度低，易受外源性NH3影響，空白過高，不能直接測定紅細胞ADA活性。

基于同樣的原因，ADA偶聯谷氨酸脫氫酶(Glutamate?Dehydrogenase，GLDH)反應通過測量340nm處NADPH(nicotinamide?adenine?dinucleotide?phosphate?reducedform，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸，還原型輔酶II)吸光度下降的速度來計算ADA活性。該法也因血清含氨干擾，以及測試系統中過高的NADPH造成非特異性氧化，而不能準確計算ADA活性。

第三代ADA測試：通過ADA偶聯嘌呤核苷磷酸化酶(Purine?nucleosidephosphorylase，PNP)和黃嘌呤氧化酶(Xanthine?Oxidase，XOD)反應連續監測法。通過測量293nm處尿酸鹽吸光度上升的速度來測算ADA活性。但是，293nm時血清吸光度太高，造成臨床應用不便。

第四代ADA測試：通過ADA偶聯PNP、XOD、過氧化氫酶(Ca?talase)和醛脫氫酶(Aldehyde?dehydrogenase)，借助過氧化氫(H₂O₂)反應測量334nm處NADPH吸光度上升的速率來測算ADA活性。該法克服了以往ADA測試的困難，但是，該法劑成本高，阻礙實際臨床使用。