[發明專利]一種測定5`-核甘酸酶的試劑盒

在審

• 申請號: 202010727098.6
• 申請日: 2020-07-26
• 公開（公告）號: CN111808918A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 馬全新;吳艷芳;謝小麗
• 申請（專利權）人: 武漢景川診斷技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/42;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

一種測定5’?核苷酸酶的試劑盒，由彼此獨立的試劑R1和試劑R2組成；所述試劑R1的組分包括：緩沖液、防腐劑、保護劑、抗干擾劑、表面活性劑、反應增強劑、過氧化物酶、嘌呤核甘磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、色原物質和水；所述試劑R2的組分包括：緩沖液、保護劑、反應增強劑、防腐劑、肌苷酸二鈉、4?氨基安替比林和水。本發明分析靈敏度高，線性可高達400U/L，重復性好，抗干擾能力強，并且對異常標本結果的檢測與實際濃度相符，且不影響正常標本測試結果準確性。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑領域，具體涉及一種5’-核苷酸酶檢測試劑盒。

背景技術

5’-核苷酸酶是一組與堿性磷酸酶不同生化性質的磷酸水解酶，主要分布于心、肝、腦、肌肉、腎和肺等，在肝內分布于膽小管、肝竇和枯否氏細胞，在肝細胞漿中含量最高，由肝臟代謝。5’-核苷酸酶在血液中活性的升高主要見于肝膽系統疾病，肝癌、肝炎以及肝硬化，特別是肝癌，常伴隨甲胎蛋白、癌胚抗原和α-巖藻糖苷酶以及其它肝功能項目同時檢測，對肝膽疾病進行綜合分析。

由于血清5’-核苷酸酶測定對肝臟疾病的診斷有較好的特異性和靈敏度，在近20年中，測定方法得到不斷發展和改進，先后發展了五代方法和的檢測試劑，其主要特點可簡述如下：

第一代：5’-核苷酸酶將5-肌苷一磷酸脫氨產生次黃苷和磷酸。通過動態測量5-肌苷一磷酸265nm處吸光度，可以測算5’-核苷酸酶活力大小。由于高底物濃度造成吸光度濃度過高，該法僅適用于5-肌苷一磷酸濃度低于15umol。如此低的底物濃度達不到底物飽和要求，造成5’-核苷酸酶活性檢測失真。因此，該法不適用于臨床應用。

第二代：5’-核苷酸酶將5-肌苷一磷酸脫氨產生次黃苷和磷酸，后者與鉬酸銨作用生成磷鉬酸，再被還原劑還原成鉬藍，顏色深淺與釋放的磷酸根成正比。測磷比色法試劑種類多，操作繁瑣、費時，不適宜自動化分析，內源性磷酸對該測定也有干擾，而且血清中堿性磷酸酶也能水解5-肌苷一磷酸生成相同的產物，反應過程中需加入Ni²⁺離子抑制堿性磷酸酶的非特異性反應，否則會影響測定結果的準確性。

第三代：Kalcker氏應用5’-核苷酸酶偶聯嘌呤核苷磷酸化酶和黃嘌呤氧化酶反應連續檢測法。通過測量293nm處尿酸鹽吸光度上升的速度來計算5’-核苷酸酶活性。但是，293nm時血清吸光度太高，造成臨床應用不便。

第四代：通過5’-核苷酸酶偶聯嘌呤核苷磷酸化酶和黃嘌呤氧化酶，過氧化氫酶和醛脫氫酶，借助過氧化氫反應測量334nm處還原型輔酶Ⅱ吸光度上升的速率來計算5’-核苷酸酶活性。該法克服了以往5’-核苷酸酶測試的困難，然而，鑒于反應步驟多，試劑成本高，阻礙實際應用。

第五代：5’-核苷酸酶經Mg²⁺或Mn²⁺激活后酶解次5-肌苷一磷酸產生次黃苷；次黃苷再通過嘌呤核苷磷酸化酶的作用，與PO₄^3—生成次黃嘌呤；后者在黃嘌呤氧化酶氧化下生成尿酸和過氧化氫；最后過氧化物酶分解水產生原子氧，氧化苯胺類顯色劑和4-氨基安替比林反應，生成紫紅色的有色醌。550nm處吸光度上升的速度來測算5’-核苷酸酶的活性。反應具有抗干擾能力強。適合自動化快速測定的特點，為臨床常規開展5’-核苷酸酶檢測試劑創造有利條件。目前市場上基本上是用的該方法。但是，市售試劑盒中存在著較多問題，比如，對異常值測定結果偏低、線性范圍偏窄、重復性和抗干擾能力較差。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明提供了一種線性范圍高、重復性好、抗干擾能力強的、能真實反映5’-核苷酸酶的活性的檢測試劑盒，并且該試劑盒對異常值測定更符合實際濃度，不影響正常標本測試結果準確性。

本發明公開了一種測定5’-核苷酸酶的試劑盒，由彼此獨立的試劑R1和試劑R2組成；

試劑R1的組分：