[發(fā)明專利]一種預(yù)防和治療創(chuàng)傷弧菌感染的卵黃抗體制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010725674.3
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN112175076A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 祁少海;蔡瑞昭;舒斌
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/02;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發(fā)明提供一種預(yù)防和治療創(chuàng)傷弧菌感染的卵黃抗體，通過以下方法制備而成：(1)從自然環(huán)境中創(chuàng)傷弧菌感染患者的樣本中分離創(chuàng)傷弧菌；(2)制備創(chuàng)傷弧菌滅活菌體抗原并對產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫；(3)收集免疫后的雞蛋，從雞蛋的卵黃中提取純化卵黃抗體。本發(fā)明的卵黃抗體可有效中和創(chuàng)傷弧菌，從而終止創(chuàng)傷弧菌感染，為后續(xù)用于該病菌的防控提供了一種有效的被動免疫制劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制品生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種預(yù)防和治療創(chuàng)傷弧菌感染的卵黃抗體制備方法。

背景技術(shù)

伴隨著社會經(jīng)濟(jì)的不斷進(jìn)步，人類對各類資源的需求越來越大。而海洋蘊(yùn)含著極其豐富的資源，促使人們逐漸將目光投向海洋。隨著各國對海洋資源及航運(yùn)的重視，人類的海洋經(jīng)濟(jì)活動日益頻繁。隨之而來的海洋相關(guān)感染性疾病發(fā)病率也在逐年上升。

創(chuàng)傷弧菌是一種致命性的海洋弧菌。截肢率、致死率居高不下。目前治療手段包括傳統(tǒng)創(chuàng)面清創(chuàng)及抗生素的使用，均無法有效降低死亡風(fēng)險?；【诤Ｑ蠹?xì)菌檢測中檢出率最高，是海洋中的優(yōu)勢菌群。在這些弧菌中僅有少數(shù)弧菌能感染人體，其中以創(chuàng)傷弧菌感染最為致命。創(chuàng)傷弧菌是一種嗜鹽性的革蘭陰性機(jī)會致病菌。其廣泛分布于世界各河海交界水域，尤其在水溫較高的低緯度地區(qū)最為常見。其可通過經(jīng)口或破損皮膚侵入人體，從而引起人體原發(fā)性敗血癥、胃腸道敗血癥及局部創(chuàng)面感染等癥狀。創(chuàng)傷弧菌感染病情兇險，病程進(jìn)展迅速。

目前主要的治療手段包括傳統(tǒng)清創(chuàng)及使用抗生素，雖然創(chuàng)傷弧菌對大部分抗生素敏感，但由于患者疏忽或受傷環(huán)境受限，往往無法實現(xiàn)早期診斷和及時使用抗生素。除傳統(tǒng)清創(chuàng)，局部創(chuàng)面缺乏其他有效的治療手段，局部使用抗生素已被證明容易引起菌群耐藥，尤其是經(jīng)胃腸道感染的患者，由于病灶在體內(nèi)，局部治療手段更加局限。

在臨床治療策略中，早期診斷及早期治療對創(chuàng)傷弧菌感染的預(yù)后意義重大。遺憾的是雖然創(chuàng)傷弧菌對大部分抗生素敏感，但由于患者疏忽或受傷環(huán)境受限等種種因素。創(chuàng)傷弧菌感染往往得不到早期診斷和及時使用抗生素等治療。而大范圍預(yù)防性使用抗生素勢必又造成創(chuàng)傷弧菌耐藥的后果。目前由于全球范圍內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)對抗生素的濫用，越來越多的國家及地區(qū)均報道創(chuàng)傷弧菌出現(xiàn)耐藥問題。另外，局部創(chuàng)面使用抗生素治療已被證明容易引起菌群耐藥而被摒棄。除了傳統(tǒng)清創(chuàng)外，局部創(chuàng)面缺乏更多的治療手段。而對于經(jīng)胃腸道感染的患者，由于病灶位于腹腔內(nèi)，局部治療手段更加受限。臨床急需能避免菌種選擇性耐藥的治療手段。

被動免疫是免疫治療的重要組成部分。在抗生素濫用嚴(yán)重的今天，被動免疫如抗體治療等因其能避免選擇性耐藥而日益得到重視。而從哺乳動物血清中提取制備特異性IgG流程復(fù)雜，成本高昂，難以實現(xiàn)大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

卵黃抗體IgY是禽類受環(huán)境特定抗原刺激所產(chǎn)生的相應(yīng)特異性抗體。在產(chǎn)蛋禽類體內(nèi)的IgY可通過循環(huán)富集到卵黃中，以保護(hù)蛋中胚胎免受環(huán)境中病原微生物的攻擊。卵黃抗體與抗生素藥物作用原理不同，其主要通過與病原微生物所攜帶的抗原或半抗原位點結(jié)合，從而改變或阻止了該抗原位點本應(yīng)發(fā)揮的功能，進(jìn)而影響病原微生物的生物活性，如抑制病原微生物的正常分裂繁殖，影響其黏附于正常組織，破壞生物膜的形成或滅活其分泌的毒力因子等等。最終，抗原抗體復(fù)合物將被機(jī)體的免疫系統(tǒng)清除。雞卵黃抗體IgY已廣泛用于水產(chǎn)業(yè)及畜牧業(yè)，但尚未用于人類疾病的預(yù)防和治療。本發(fā)明首次提出將雞卵黃抗體IgY用于預(yù)防和治療人類感染性疾病。

本發(fā)明的目的在于提供一種起效快、經(jīng)濟(jì)高效、無明顯毒副作用且可廣泛用于預(yù)防和治療創(chuàng)傷弧菌感染而不引起菌種選擇性耐藥的雞卵黃抗體。另一目的是提供抗創(chuàng)傷弧菌雞卵黃抗體的制備方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一種預(yù)防和治療創(chuàng)傷弧菌感染的卵黃抗體，通過以下方法制備而成，所述方法包括以下步驟：

(1)從創(chuàng)傷弧菌感染患者的樣本中分離創(chuàng)傷弧菌；

(2)制備創(chuàng)傷弧菌滅活菌體抗原并對產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫；