[發明專利]橡膠草耐旱基因TkMYC2、蛋白質、引物、載體、宿主菌及其應用

有效

• 申請號: 202010725600.X
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111662368B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 閆潔;黃俊;張云川;孫軍亭;孫輝
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/84;C12N15/29;C12N15/11
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發明涉及生物技術領域，具體涉及涉及橡膠草耐旱基因TkMYC2、蛋白質、引物、載體、宿主菌及其應用。所述TkMYC2基因cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。其編碼的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。在自然干旱脅迫下，與野生型相比，過表達TkMYC2轉基因橡膠草葉片生長狀況良好。過表達TkMYC2基因能夠明顯提高POD，SOD，CAT酶活性來響應干旱壓。本發明橡膠草TkMYC2基因為提高橡膠草抗旱性，提供一種新的解決途徑。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及橡膠草耐旱基因TkMYC2、蛋白質、引物、載體、宿主菌及其應用。

背景技術

橡膠草(Taraxacum kok-saghyz Rodin)，又稱俄羅斯蒲公英，是多年生二倍體產膠植物。有研究發現橡膠草所產橡膠的理化性質與橡膠樹所產橡膠相似且橡膠草根組織具有高達20％的干膠。但是，每年干旱會導致橡膠嚴重減產，造成巨大的經濟損失。

TkMYC2基因是一個橡膠草耐旱基因，在轉TkMYC2基因的橡膠草的耐旱性得到很大提高，目前該基因的耐旱性功能尚未見報道。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種與橡膠草耐旱性狀有關的基因TkMYC2，所述基因TkMYC2的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明的目的之二是提供由所述的基因TkMYC2編碼的蛋白質，所述蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本發明的目的之三是提供擴所述基因TkMYC2的引物，上游引物如SEQ ID NO：3所示，下游引物如SEQ ID NO：4所示。

本發明的目的之四是提供一種含有所述的基因TkMYC2的表達載體。

本發明的目的之五是提供一種含有所述的基因TkMYC2的宿主菌。

本發明的目的之六是提供所述基因TkMYC2在橡膠草耐旱遺傳改良中的應用。

本發明的目的之七是提供所述基因TkMYC2在轉化雙子葉植物以產生耐旱轉基因雙子葉植物中的應用。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

1、本發明發現橡膠草TkMYC2基因編碼的蛋白屬于bhlh家族轉錄因子，含有一個Pfam bHLH-MYC_N和一個螺旋-環-螺旋保守結構域。該基因受到PEG誘導表達量提高，說明TkMYC2基因是抗旱相關的轉錄因子。

2、本發明首次報道TkMYC2轉錄因子能夠提高橡膠草抗旱性。首先對前期茉莉酸甲酯處理橡膠草的轉錄組數據進行分析，篩選出目的片段。針對TkMYC2基因進行PEG誘導處理。通過PCR技術克隆出橡膠草TkMYC2 cDNA全長，與35S植物表達載體構建重組質粒，轉化至GV3101根癌農桿菌中。利用農桿菌介導的TkMYC2導入橡膠草中，獲得過表達轉基因橡膠草。然后過表達TkMYC2橡膠草進行干旱表型分析以及各項生理指標測定。結果顯示，過表達TkMYC2橡膠草植株耐旱性明顯提高，為提高橡膠草抗旱性，提供了一種新的解決途徑。

附圖說明

圖1為TkMYC2基因克隆電泳檢測圖，圖中，M：DNA MarkerⅢ；1：TkMYC2基因。

圖2為TkMYC2保守結構域分析。

圖3為重組質粒pMD-19T-TkMYC2酶切鑒定，圖中，M：DNA MarkerⅢ；1和2：BamHⅠ和PstⅠ酶切pMD-19T-TkMYC2；3：pMD-19T-TkMYC2重組質粒。

圖4為重組質粒pCAMBIA2300-TkMYC2酶切鑒定，圖中，M：DNA MarkerⅢ；1：BamHⅠ和PstⅠ酶切pCAMBIA2300-TkMYC2；2：pCAMBIA2300-TkMYC2重組質粒。