[發明專利]一種石斛的在線富集方法

在審

• 申請號: 202010723708.5
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111929396A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 曹君;彭黎卿
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08;G01N30/88
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及天然藥物的分離富集領域，尤其是涉及一種石斛的在線富集方法，包括如下步驟：（1）將石斛提取液加入至含有CD的磷酸溶液中得到樣品溶液；（2）將甲醇與SDS溶解在磷酸溶液中得到BGS溶液；（3）將經超聲和過濾處理的樣品溶液通過經活化并用BGS溶液沖洗的毛細管進樣；（4）在高電壓下進行分離與富集，得到分離與富集后的活性物質。本發明采用CD輔助的掃集?MEKC方法富集石斛中的活性物質，在分離效果好的同時還具有富集效率高、操作簡單、有機溶劑用量少、分析時間短、不需要附加儀器等優點；同時使用CD增加石斛中有效成分在水中的溶解度，進而提高石斛中有效成分在經過毛細管電泳后的分離與富集效果。

技術領域

本發明涉及天然藥物的分離富集領域，尤其是涉及一種石斛的在線富集方法。

背景技術

鐵皮石斛是一種瀕危的珍貴藥材，由于其藥理和臨床作用，幾個世紀以來在中國和亞洲其他國家被廣泛用作中藥材和功能性食品。從清代起，鐵皮石斛的莖、即鐵皮楓斗就作為中藥材被廣泛使用。它具有滋陰、益胃、潤肺和延年益壽的作用。藥理研究表明，鐵皮石斛具有多種藥理活性，如抗炎、抗腫瘤、免疫調節、降血糖等。鐵皮石斛的主要活性成分為多糖和酚類。

迄今為止，對鐵皮石斛的研究主要集中在多糖方面，集中在分析其他化合物如酚類的研究十分有限，并且以往的研究主要采用了高效液相色譜法、近紅外光譜法、超高效液相色譜-電噴霧質譜法等檢測方法，例如公開號為CN106680403A的“一種檢測鐵皮石斛中石斛酚的方法”，包括以下步驟：(1)標準品溶液的配制；(2)供試品溶液的配制：稱取鐵皮石斛樣品，然后用甲醇水溶液作為提取溶劑對鐵皮石斛樣品進行提取，得到鐵皮石斛提取液，之后將鐵皮石斛提取液中的溶劑除干，再復溶于色譜級甲醇中，然后放置12～24小時，最后進行過濾處理，所得的濾液即為供試品溶液；(3)供試品溶液的測定：采用HPLC-DAD檢測方法對標準品溶液和供試品溶液進行檢測。該方法只能提取石斛中的石斛酚，而對于石斛中的其他物質并不能做到很好地富集與分離，并且該方法的富集與分離效果并不夠理想。

發明內容

本發明是為了克服技術的只能分離富集小部分活性物質、富集與分離效果不理想的缺點，提供一種石斛的在線富集方法，能夠同時從石斛中分離并富集多種活性物質，并且分離效果好、富集程度高。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種石斛的在線富集方法，包括如下步驟：

(1)將石斛提取液加入至含有CD的磷酸溶液中，得到CD濃度為30-130mM的樣品溶液；

(2)將甲醇與SDS溶解在磷酸溶液中得到BGS溶液；

(3)將經超聲和過濾處理的樣品溶液通過經活化并用BGS溶液沖洗的毛細管進樣50-200s；

(4)在高電壓下進行分離與富集，得到分離與富集后的活性物質。

本發明采用CD輔助的掃集-MEKC方法富集石斛中的活性物質，在該方法中，樣品溶液不含偽固定相PSP，與含有PSP的背景緩沖液BGS相比，其具有較低，相似或較高的電導率。當施加電壓后，PSP穿透樣品區，樣品區內的分析物與BGS中的PSP發生分配和相互作用，使得分析物被采集并積累。在掃集過程中，分析物區域不斷縮小，石斛中多種有效成分被分離并富集，分離效果好的同時還具有富集效率高、操作簡單、有機溶劑用量少、分析時間短、不需要附加儀器等諸多優點。

CD是通過酶解淀粉得到的環狀低聚糖，其具有截錐狀結構，并具有親水的外表面和疏水的內腔。CD結構上眾多的羥基可以與水溶液中的水形成氫鍵，增加了CD在水中的溶解度。并且CD能通過非共價相互作用將石斛中的活性物質全部或部分吸收到它們的疏水空腔中，從而與石斛中的活性物質形成包合物，使得石斛中的活性物質溶解在CD中，并改善了石斛中的活性物質的化學穩定性和水溶解度等，從而提高毛細管電泳在線富集技術的靈敏度，有利于提高分離與富集效果。