[發明專利]檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202010720079.0
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111781383A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 黃飚;吳青青;李婷;周秀梅;王毅剛;張麗
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學紹興生物醫藥研究院有限公司;浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/534
• 代理公司: 嘉興中創致鴻知識產權代理事務所(普通合伙) 33384
• 代理人: 趙麗麗

1.檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒，其特征在于由以下部分：包被板(1)、分析緩沖液(2)、抗PLA2R自身抗體標準品(3)、銪標記的羊抗人IgG抗體(4)、濃縮清洗液(5)、增強液(6)和盒體(7)所組成。

2.如權利要求1所述的檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒，其特征在于所述包被板(1)的制備如下：包被板(1)包被固相PLA2R不同表位抗原(CysR或CTLD1或CTLD67或CTLD78或CTLD678)，用50mmol/L(pH 9.6)Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液將純化的PLA2R不同表位抗原稀釋至2.5μg/mL作為包被液，分別在96微孔板各孔中加100μL，4℃放置過夜；棄去包被液，用50mmol/L(pH 9.6)Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液洗滌3次；然后每孔加200μl含3g/L BSA的上述緩沖液封閉，4℃放置過夜，棄去封閉液，拍干后真空抽干，板條密封后置-20℃冷凍保存待用。

3.如權利要求1所述的檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒，其特征在于按質量百分比計所述分析緩沖液(2)的制備如下：取6.06g三羥甲基氨基甲烷和8.8g NaCl溶于去離子水中，用鹽酸調節PH值為7.8，然后加入5g BSA、1g的NaN₃，隨后加去離子水定容至1L，分裝，置于2-8℃下保存即得。

4.如權利要求1所述的檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒，其特征在于抗PLA2R自身抗體標準品(3)的制備如下：通過初步實驗，在膜性腎病患者中篩選出一個含高濃度Anti-PLA2R不同表位決定簇自身抗體的血清，將高濃度的抗PLA2R不同表位決定簇自身抗體血清用分析緩沖液稀釋到系列濃度為標準品，0U/ml濃度點為分析緩沖液。

5.如權利要求1所述的檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒及其檢測方法，其特征在于銪標記的抗人Ig抗體(4)的制備方法如下：取抗人IgG抗體l mg，采用超濾管轉換緩沖條件至0.155moL/L NaCl的Na₂CO₃-NaHCO₃(50mmoL/L，pH 8.5)緩沖液中。在含0.2mg的Eu³⁺-N₂-[p-異氰酸-芐基]-二乙烯三胺四乙酸(Eu³⁺-DTTA)凍干粉的小瓶中加入l mg/0.5ml的抗人IgG抗體，25℃磁力攪拌反應20小時。反應液經用80mmoL/L tris-HCl pH 7.8緩沖液平衡的Sepharose CL-6B柱(1×40cm)層析，采用DELFIA-1420時間分辨熒光免疫分析儀檢測Eu³⁺熒光值，收集蛋白峰，用緩沖液稀釋后分裝凍干保存，抗人IgG抗體可以列舉但并不只限于羊抗人IgG抗體、鼠抗人IgG抗體、兔抗人IgG抗體等。

6.如權利要求1所述的檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒，其特征在于洗滌液(5)的制備如下：14.5mmol/L NaCl、0.2mL/L Tween-80和0.2％NaN₃的50mmol/L pH7.8的Tris-HCl。

7.如權利要求1所述的檢測M型磷脂酶A2受體IgG的免疫分析試劑盒，其特征在于增強液(6)的制備如下：體積濃度為3.6‰的冰醋酸，0.5g/L的醋酸鈉，0.05g/L的β-萘甲酰三氟丙酮，0.03g/L的三辛基氧化膦和體積濃度為1‰的Triton X-100的混合溶液。